【摘 要】
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目的：分析我国上海地区部分HIV-1分离株Vif基冈突变率;表达并纯化HIV-1 Vif蛋白,制备HIV-I Vif鼠多克隆抗体,并通过ELISA法检测HIV-1 Vif鼠多克隆抗体免疫原性与免疫反应性。方法：采用RT-PCR法扩增我国上海地区HIV-1分离株Vif蛋白编码基因并测序,结合GeneBank中已经注册我国其他地区HIV-1Vif基因序列,与HIV-1国际标准毒株比较,分析我国上海HI
【机 构】
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上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心,上海 201508 上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心
【出 处】
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第12次长江三角洲公共卫生临床体系建设学术研讨会
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目的：分析我国上海地区部分HIV-1分离株Vif基冈突变率;表达并纯化HIV-1 Vif蛋白,制备HIV-I Vif鼠多克隆抗体,并通过ELISA法检测HIV-1 Vif鼠多克隆抗体免疫原性与免疫反应性。
方法：采用RT-PCR法扩增我国上海地区HIV-1分离株Vif蛋白编码基因并测序,结合GeneBank中已经注册我国其他地区HIV-1Vif基因序列,与HIV-1国际标准毒株比较,分析我国上海HIV-1感染者Vif蛋白编码基因突变的分子流行病学;从中选择突变较少的Vif编码基因连接入原核表达载体pET32b(+),将构建好的质粒转化入细胞BL21D3(Star)进行蛋白表达、纯化HIV-1Vif蛋白,并以ELISA方法应用重组Vif蛋白检测HIV感染者及正常人血清中Vif抗体;以纯化的Vif蛋白免疫小鼠制备鼠多克隆抗体。
结果：上海地区HIV-1流行毒株间Vif基凶存在较高突变,与HIV-1国际标准毒株比较突变系数为0.179±0.006,其中G(C)→A和A(T)→G突变率较高为25％;HIV感染者血清及正常人血清与重组Vif蛋白反应特异性无差异(P＞0.05);ELISA法检测制备的鼠多克隆抗体与重组Vif蛋白可发生特异性反应(P＜0.01)。
结论：本试验提供了我国上海地区HIV-1分离株Vif基因的突变数据;表达、纯化HIV-1 Vif蛋白,制备了HIV-1 Vif鼠多克隆抗体。
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