多重反转录聚合酶链反应检测鉴别H5亚型禽流感方法的建立

来源 :中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zxy86983028
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参考A型AIV M<,2>基因和HA基因序列,人工设计了两对引物.其中XZ145-2和XZ146为通用引物,可以检测所有A型AIV,扩增层度为244bp;XZ H5-1和XZ H5-5为H5亚型AIV特异性引物,扩增长度为860bp.通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,成功建立了快速检测鉴别H5亚型AIV多重RT-PCR技术.特异性和敏感性试验结果表明,该多重RT-PCR对H5亚型AIV能够同时扩增出两条大小分别为244bp和860bp的cDNA片段,而对其他A型AIV只扩增出244bp的cDNA片段,对其他常见禽病病原则无论是在244bp还是860bp处均无cDNA扩增片段出现,结果为阴性;该多重RT-PCR最低可检测鉴别10pg的H5亚型AIV RNA.利用该多重RT-PCR对AIV分离物进行检测,结果与血清学试验相符,符合率为100﹪.
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