猪带绦虫乳酸脱氢酶基因的序列分析、克隆表达和免疫学分析

来源 :中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tom1313
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:利用生物信息学方法从猪带绦虫成虫cDNA文库中识别乳酸脱氢酶A的基因(lactate dehydrogenase A,LDH-A),分析和预测其编码蛋白的结构和功能,并对其进行克隆、表达和免疫学特性的初步研究。 方法:利用生物信息学网站如NCBI和ExPASy中有关基因和蛋白的序列和结构信息分析的各种工具,结合其它生物信息学分析软件包,从猪带绦虫成虫全长cDNA质粒文库中识别乳酸脱氢酶A(TsLDH-A)的基因及其编码区,分析、预测该基因编码的蛋白的结构与功能;并将Ts LDH-A克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠杆菌BL-21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定及用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化产物用蛋白印迹(western Blotting)进行免疫学分析。 结果:该基因全长1332 bp,编码331个氨基酸。其氨基酸序列与其它物种LDH-A氨基酸序列一致性可达54%,具有乳酸脱氢酶保守结构域。其编码的蛋白理论分子量和等电点分别为35461.1 Da和7.09;有3个跨膜区,无亚细胞定位序列;具有多个磷酸化位点,蛋白的理化性质较稳定。预测有四个主要的B细胞抗原表住,L-乳酸脱氢酶活化位点之一的His192包含于表住190-199 aa中。酶催化位点的三个关键氨基酸在不同物种中保守,在空间结构上位置相互靠近。PCR、双酶切及DNA测序结果均表明重组质粒pET-28a(+)-Ts LDH—A构建成功。SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠杆菌BL-21/DE3中获得高效表达。经亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白能被Ts LDH-A重组蛋白免疫的SD大鼠血清、感染了猪带绦虫的病人血清及猪血清识别,表明其具有较好的免疫原性和免疫反应性。 结论:应用生物信息方法从猪带绦虫成虫cDNA文库中筛选出了Ts LDH—A的全长序列并预测得到其编码蛋白的结构与功能方面的信息,该基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的高效表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。
其他文献
通过虫卵孵化试验(egg hatch test,EHT),消化道线虫幼虫发育率的统计,对乌鲁木齐地区羊消化道线虫抗药性进行了检测。结果显示:乌鲁木齐地区育肥羊场的羊感染的消化道线虫,特别是
会议
根据本实验室前期扩增的各旋毛虫隔离种线粒体Ls-rRNA基因序列,设计了一对特异性引物及TaqMan MGB探针。以Ls-rRNA阳性重组质粒为模板,建立了实时荧光PCR检测旋毛虫的方法。该
会议
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种应用广泛的基因功能研究工具,不仅应用在秀丽隐杆线虫这样的模式生物中,而且已经成为鉴定基因功能高通量的筛选方法。但是,最近的研究发现,R
会议
用伊氏锥虫优势变体(Hb Tat1.18)纯化抗原作为免疫原免疫小鼠,利用淋巴杂交瘤融合技术,筛选出两株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3D7、589。经间接EUSA检测3D7
用血液压滴标本检查法和姬姆萨染色法对犀牛和犬可疑附红细胞体和梨形虫进行鉴别检查,结果血液样品中均发现大量细胞外颗粒和星芒状红细胞。压滴标本随时间延长,pH和电解质变化
采用GC-MS技术(气相-质谱联用色谱技术)分析旋毛虫肌幼虫和成虫的脂肪酸组成,并与宿主中相应部位的脂肪酸组分进行比较分析,探讨旋毛虫在生长发育过程中脂肪酸组分的变化及其受
会议
2012年6月18日,作为中国亿万女性的代表,刘洋在太空的举手投足获得了高度关注。而她微笑背后的磨练与坚持,则是一段被遗忘的时光。  “非你莫属”  2009年夏天,在焦躁的蝉鸣声中,解放军总装备部悄然启动了第二批预备航天员的选拔工作,有15名女性候选人入围。  “不用担心,非你莫属。”广空某飞行大队教导员吴达发至今仍清晰记得,刘洋找他做个人报名材料的鉴定时,他这样回答。  作为飞行大队副大队长,
自1993年转染技术首次在弓形虫中成功报道以来,顶复门原虫的转染研究得到了快速发展,不仅在弓形虫、疟原虫和住肉孢子虫等实现了稳定转染,而且在体外细胞上生长效率较低的柔嫩艾
会议
利用两株伊氏锥虫的核糖体基因内转录间隔区(ITS1-5.8S-ITS2)的序列分析和系统进化学分析来研究来两株水牛伊氏锥虫的分类学地位。通过对我们从水牛分离到的锥虫(广西株)和湖
会议
本研究以纯化的猪附红细胞体特异性抗原作为包被抗原,在建立猪附红细胞体病间接ELISA检测方法的基础上进行了各反应参数的优化,确定了各参数的最适反应条件,并初步组装成试剂盒
会议