【摘 要】
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为构建可有效抵抗流行性腹泻病毒(PEDV)入侵的可诱导黏膜免疫反应的核酸疫苗,本研究以RT-PCR扩增PEDV SC-L株的S基因主要抗原编码区域(简称S1,长2367bp,编码S蛋白N末端1-789
【机 构】
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四川农业大学动物医学院,动物传染病与基因芯片实验室,四川雅安625014
【出 处】
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四川省畜牧兽医学会2014学术年会
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为构建可有效抵抗流行性腹泻病毒(PEDV)入侵的可诱导黏膜免疫反应的核酸疫苗,本研究以RT-PCR扩增PEDV SC-L株的S基因主要抗原编码区域(简称S1,长2367bp,编码S蛋白N末端1-789氨基酸位点),插入pMD19-T载体,构建载体pMD19-T-S1,再将S1基因片段插入双启动子真核表达载体pVAXD中,构建了pVAXD-S1表达载体.经免疫荧光法鉴定S1基因可在COS7细胞中正常表达后,将pVAXD-S1电转入鼠伤寒减毒沙门氏菌SL7207中,构建了携带S1基因的重组减毒沙门氏菌SL7207(pVAXD-S1),对该重组菌株的生长曲线、携带质粒的稳定性、口服小鼠的安全性及目的基因在体内转录等特性进行鉴定.结果表明SL7207(pVAXD-S1)在含卡那霉素(100μg/mL)的培养环境中稳定,以1×109CFU/只口服免疫小鼠具有良好的安全性,携带的S1基因能在小鼠组织(回肠末端)内正常转录及表达.本研究为深入开展减毒沙门氏菌疫苗菌株SL7207(pVAXD-S1)的免疫评价及构建PEDV与其他抗原基因联合免疫DNA疫苗奠定了基础.
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