耐盐木霉菌株的分离鉴定及其抗菌促生作用

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2014年本实验室从山东东营、潍坊、海阳、威海、黄海等滨海盐地采集了120个盐渍土样品,采用稀释平板法从这些盐渍土样中分离出83个木霉菌株。耐盐菌株的筛选方法为PDA中加入2.3%的NaCl,25℃培养72 h,测量菌落半径,以PDA培养基为对照,计算耐盐率(%)[耐盐率=100×处理菌落半径/对照菌落半径×100%]。在含2.3%NaCl的PDA平板上筛选出耐盐率高于60.00%的木霉菌株10个,这10个菌株的生长量相当于无NaClPDA培养基的60.00%~81.33%。10个耐盐菌株采用形态学、ITS以及TEF序列分析完成鉴定,其中5株为哈茨木霉(Trichoderma harzianum),2株为长枝木霉(T.longibrachiatum),2株为棘孢木霉(T.asperellum),1株为盖姆斯木霉(T.gamsii)。耐盐率最高(81.33%)的是盖姆斯木霉TW20029,采自山东威海滨海滩涂盐渍地中,这也是我省首次发现T.gamsii,本文进一步研究了TW20029的抗病促生作用。采用PDA平板对峙培养的方法,计算TW20029对4种病原菌的抑制作用[抑制率=(D-d)/D×100%,其中D为对照灰霉菌生长直径,d为对峙病原菌生长直径且木霉覆盖生长的部分不计入],结果表明TW20029对水稻立枯病病菌(Rizoctonia solani)室内72 h抑制率为70.13%,对终极腐霉(Pythium ultimum)室内96 h抑制率为78.72%,对黄瓜枯萎病(Fusarium oxysporum)和黄瓜灰霉病(Botrytis cinerea)室内96h抑制率均为100%,说明TW20029对这4种病原菌均具有高效的抑制作用。通过室内种子萌发实验测定了TW20029孢子悬浮液(108ofu/mL)对黄瓜种子的发芽影响,实验结果表明TW20029孢子悬浮液能够显著提高黄瓜种子的发芽率(85.00%)、发芽指数(11.24)和活力指数(9.02),而水对照的发芽率仅为60.33%,发芽指数为9.07,活力指数为6.00,可以看出TW20029对黄瓜种子的发芽具有较强的促进作用。
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