【摘 要】
:
为了得到能高效表达较高活性的核苷磷酸化酶的重组大肠杆菌,我们尝试选择pET-11a-d和BL21(DE3)来对核苷磷酸化酶基因进行克隆和表达。通过蛋白分析和活性测定以及与野生茼活性的比较,重组蛋白的表达量占到了总蛋白的50%,其活性也较高。因此,构建的工程菌可以用来高效表达具有较好活性的核苷磷酸化酶。
【机 构】
:
华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海 200237 南通秋之友生物科技有限公司,江苏 南
【出 处】
:
沪、苏、闽暨全军生物技术药物研讨会
论文部分内容阅读
为了得到能高效表达较高活性的核苷磷酸化酶的重组大肠杆菌,我们尝试选择pET-11a-d和BL21(DE3)来对核苷磷酸化酶基因进行克隆和表达。
通过蛋白分析和活性测定以及与野生茼活性的比较,重组蛋白的表达量占到了总蛋白的50%,其活性也较高。因此,构建的工程菌可以用来高效表达具有较好活性的核苷磷酸化酶。
其他文献
本文构建了人乳头瘤病毒16型与11型L1基因双价重组杆状病毒转移质粒并对其进行鉴定.方法:采用PCR法从尖锐湿疣组织标本中扩增人乳头瘤病毒11型晚期基因L1,并对其进行克隆测序;利用基因重组技术将人乳头瘤病毒16型和11型L1晚期基因共同装入杆状病毒转移载体中,分别位于强启动子Ppolh和弱启动子P10之下;利用酶切和PCR技术对双价重组杆状病毒转移质粒进行鉴定.结果:PCR扩增获得尖锐湿疣组织中
本文用IL-4联合IL-2共同诱导A-NK细胞,研究A-NK细胞体外细胞毒性及对直肠肿瘤生长的抑制作用.方法:用基因重组的IL-2和II-4联合活化A-NK细胞,用LDH-L释放法测定效应细胞的细胞活性,同时观察A-NK细胞对人直肠癌细胞在裸鼠体内的生长抑制作用.结果:IL-2单独或IL-2联合IL-4均可以诱导A-NK细胞,但二者联合效果更好,通过LDH-L测定活化的A-NK细胞可在体外杀伤K5
本文探讨了大肠癌细胞和组织中BAI1基因的表达情况及BAI1对血管生长和肿瘤生长的抑制作用.方法:提取大肠癌细胞RNA,按RT-PCR试剂盒的步骤反转录成cDNA,PCR产物行2﹪琼脂糖凝胶电泳分析.BAI1对血管生长和肿瘤生长的抑制作用应用微血管数量(MVQ)和肿瘤转移实验的方法进行.结果:大肠癌细胞、癌组织中大多数BAI1不表达或表达下降,在全部转移的淋巴结中不表达,在小鼠CC95大肠癌细胞移
为了探讨动物对不同环境温度的生理化反应性及某些生化指标变化的规律性,本文以健康荷斯坦黑白花奶牛为试验对象,研究了不同环境温度下(5℃、10℃、15℃、20℃、25℃)对奶牛血清的各项生化指标的影响.研究结果表明:肌酸激酶(CK)在血清中的活性随着温度的上升呈波动性下降趋势,特别在25℃时显著低于其他温度组;乳酸脱氢酶(LDH)在血清中的含量随着温度渐升而呈下降趋势,特别在15℃以后呈大幅度下降;γ
目的:通过对人Eg5头区cDNA逆行克隆、表达及产物纯化、活力的初步鉴定,为未来的抗肿瘤药物的高通量筛选获得足够董的靶标蛋白打下了基础。方法:提取HJ60细胞总RXA,通过RT-PCR获得包括头区的386个氦基骏长的cDNA,构建原核表达质粒,转化大肠杆菌诱导表达蛋白。分离纯化、检验ATP酶的活性和阳性药物的抑制效果。结果:测序证实克隆得到的序列完全正确。SDs—PAGE检测纯化后的蛋白分子量在4
从人工培养的灰树花子实体中,经过DEAE Scpharose Fast Flow阴离子交换树脂和Toyopearl Hw-75分子筛分离纯化得到一种多糖。运用紫外扫描,薄层层析,高效液相色谱法进行纯度鉴定和红外光谱、核磁共振进行结构鉴定。结果表明,在经过分离纯化后得到了一种α葡聚糖。经过初步药效学实验证明这种多糖可以有效降低KKay小鼠体内血糖含量,并且能够较长期的控制小鼠血糖水平。
研究卵泡刺激素受体 (follicle sLimulating H0rmoncreccptor,FSHR)作为男性免疫避孕疫苗的可能性。利用分子生物学方法克隆表达卵泡刺激素受体FSHR,以此作为免疫原免疫雄性冠毛猕猴,观察免疫应答反应及其对精子生成的影响。结果表明,在噬菌体中表达出FSHR 蛋白多肽,免疫成年雄性冠毛猕猴产生较强的免疫应答,血清抗体效价达到1:l000,免疫后的雄性猕猴在疫苗加强注
本论文研究了细菌素产生菌Bacillus subtilisis FBl23所产细菌素的理化性质及其抑菌谱。B.subtjlis FBl23经过28C、32小时的发酵得到发酵上清液,用饱和度为50%的硫酸铵溶液沉淀发酵上清液中的细菌素。以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌,采用牛津杯法对细菌素粗品进行理化性质的研究,结果表明该细菌素最适作用pH 为6.0,最适作用温度40℃,具有较广的pH作用范围和较
目的:探讨FSH受体胞外多肽抗原作为女性生殖调节疫苗的可能性。方法:利用分子生物学技术克隆和表达卵泡刺激素受体(FSHR)胞外片段多肽蛋白,重组噬菌体表达FsHR胞外区A18 27,B25 34和C29 38三种多肽片段。将其作为抗原免疫Balb/c雌性小鼠,观察小鼠免疫应答,用表达FsHR的CHO细胞膜蛋白与”、I-FSH竞争结合实验测定抗体亲和力,观察小鼠生育力的变化。结果:重组噬菌体表达FS
经筛选得到一株高产核糖核酸(RNA)的热带假丝酵母(Candiatropicalis)TOD-0605,通过优化该茼株产核酸的培养条件,将其摇瓶产核酸水平从8%提高至16%,并通过优化发酵罐参数使菌体湿重达到80g/l。