【摘 要】
：
类病毒颗粒(VLP)是新一代的病毒疫苗.其中乙肝病毒核心抗原(HepattIsB vIrus cor eantI-gen,HBcAg)不仅自身具有诱导乙肝核心抗体的作用,而且在其C端、N端以及免疫原区均可插入外源片段以产生特异的免疫反应,是一种理想的类病毒颗粒疫苗载体.由于HBcAg颗粒的亚基之间通过二硫键组装,具有一定的耐热性,所以研究其热稳定性对于选择合适的分离纯化条件和去除杂质的策略有重要意
论文部分内容阅读
类病毒颗粒(VLP)是新一代的病毒疫苗.其中乙肝病毒核心抗原(HepattIsB vIrus cor eantI-gen,HBcAg)不仅自身具有诱导乙肝核心抗体的作用,而且在其C端、N端以及免疫原区均可插入外源片段以产生特异的免疫反应,是一种理想的类病毒颗粒疫苗载体.由于HBcAg颗粒的亚基之间通过二硫键组装,具有一定的耐热性,所以研究其热稳定性对于选择合适的分离纯化条件和去除杂质的策略有重要意义.本研究以含有HBcAg的细胞培养液为对象,经过细胞破碎后,在不同温度和时间下处理细胞破碎液,然后通过疏水层析和凝胶过滤层析纯化HBcAg.结果发现在40oC到90oC之间,随着加热预处理温度的升高,杂蛋白的去除率从2.1％提高到89.7％.但是经过70oC及以上温度加热预处理得到的最终HBcAg纯化样品,其分子量与水力学半径发生了明显的增大.推测原因可能是在70oC及以上温度加热过程中,HBcAg颗粒亚基之间的空隙变大,破碎液中分子量较小的杂质可以进入到颗粒的内部,从而造成了水力学半径以及表观分子量的变化.而在60oC及以下温度下加热预处理得到的纯化样品中,未观察到此种现象.此外,我们用纯品HBcAg在90oC下加热30min,也没有发现HBcAg尺寸的增大,HBcAg仍保持稳定的二级结构以及颗粒的完整性.我们又通过Rnase与阿霉素在不同温度下扩散进入HBcAg颗粒的动力学实验,进一步验证了小分子物质在高温状态下可以进入颗粒内部.结合HBcAg的结构特点,以及对杂蛋白的去除效果,我们确定了一种加热预处理后进行层析的纯化HBcAg工艺.在60oC下加热预处理30min,然后再进行Butyl-S疏水层析和Superdex 200凝胶过滤层析获得纯品.与未经预处理的纯化过程相比,HBcAg的纯度由87.25％提高到100％,收率达到41.92％.本文研究为快速有效纯化HBcAg提供了基础.同时,高温状态下小分子能够进入HBcAg颗粒内部的特性有望为小分子药物的包埋提供一种新的载体.
其他文献
Mevalonate is one of the most important intermediate in the biosynthesis of more than 50 thousand kinds of natural terpeniods.Choice of appropriate feedstocks for industrial biotechnology is of import
糖胺多糖作为蛋白聚糖的组成成分,主要分布在细胞外基质和细胞表面,用来指导很多生物过程.由于CS的分子量大,生物利用度低,使得其很多功效不能得到有效的发挥,很多研究表明酶法制备低分子量的CS可以有效克服以上缺点,因此制备低分子量的CS具有重要意义.硫酸软骨素裂解酶(chondroitinase,ChSase)是一类能将CS、软骨素、透明质酸等糖胺聚糖降解为不饱和二糖及寡糖的裂解酶.本研究首次将ChS
纳米炭材料由于其独特的物化性质,在催化、吸附及能源存储等多个领域展现出巨大的应用前景.近年来,我们依据表/界面物理化学及胶体化学、溶液化学的基本原理,从分子底层设计的溶液化学出发,致力于发展纳米结构多孔材料合成新方法,促进和控制分子组装"定向进化"过程,认识功能集成新规律,丰富定向设计和可控制备新理论,创制新结构高性能多孔炭材料,并将其应用于气体捕集、多相催化及能源存储等领域.
唾液酸是一种九碳糖神经氨酸,是糖蛋白、低聚糖、糖脂的主要成分.作为一种天然的生理活性物质和糖蛋白的重要糖基化组分,唾液酸在机体、器官或组织内的含量水平能反映许多重要的生理信息.研究发现,肿瘤患者的血清中SA含量普遍高于正常人的水平;燕窝、母乳等食品中唾液酸的含量与它们的营养价值有密切关系.因此,准确测定生物样品中的唾液酸含量成为了当前唾液酸研究的一个热点,也建立了许多种测定不同生物样品中唾液酸含量
治疗性疫苗由于可以依靠生物体自身免疫系统,识别并清除体内被感染的细胞,实现对多种疾病(艾滋、乙肝、肿瘤等)的治疗,已成为日前研究人员关注的热点.治疗性疫苗发挥高效治疗作用的关键在于激活免疫系统产生细胞免疫应答,对靶细胞进行特异性的细胞毒性T细胞杀伤(CTL).为了实现此目的,抗原提呈细胞(APC)需要有效摄取疾病相关抗原并进一步加工处理,通过MHC-I复合物的形式递呈给CD8 T细胞.然而,外源性
Biotransformations in organic media are enjoying great interest for most of the synthetically interesting substrates and products are not soluble in aqueous solution.Examples of lipase-catalyzed react
金属有机骨架(Metal Organic Frameworks,MOFs)是一类新型有机-无机杂化的多孔材料,具有比表面积大、孔隙率高和结构可调等特点,在气体吸附、分离和多相催化等多个领域均有较好的应用前景.虽然现有报道的MOFs已超过10000种,但部分MOFs材料的热稳定性和化学稳定性较差,因此,实际可用于酸催化领域的并不多.拉瓦希尔骨架(Materials of Institute Lavo
碳纳米管具有优异的机械性能,自其首次被发现以来,人们一直探索将其用于制备纳米复合材料.传统的思路是从提高增强相的分散性及与基体材料的界面作用角度入手,但受制于基体材料本身力学性能,增强效果相对有限,力学强度仅在数十MPa,限制了其在结构材料的应用.对位芳纶(PPTA)作为一种高性能高分子材料,具有优异的机械性能,通过制备对位芳纶合适的分散体系并与碳纳米管进行复合,利用强强联合的效应,有望制备新一代
重金属对人类健康及环境造成很大威胁,这一问题日益引起全世界关注.在重金属离子中,铬的危害非常大,铬在水溶液中以Cr(Ⅵ)和Cr(Ⅲ)这两种形式稳定存在,Cr(Ⅵ)可致癌致畸致突变,具有非常强的毒性,而Cr(Ⅲ)基本无毒.本文利用从深海污泥中分离出的一株海洋黑曲霉Aspergillus niger,尝试从含六价铬离子溶液中还原成三价铬的研究.在我们的前期工作中发现,该菌能够表达较高酶活的纤维素酶,同
Protein A含有5个可以和抗体IgG分子的Fc段特异性结合的结构域.将Protein A偶联至基质上(如琼脂糖和聚合物微球等),可以与抗体特异性结合,选择性极高.通常用作于单克隆抗体纯化,近年来Protein A亲和层析也迅速成为抗体药物制备的关键步骤.在选择Protein A层析介质时,选择高载量的Protein A介质是降低成本、提高纯化效率的明智选择.此外,考虑到抗体药物生产的要求,在