目的基于新一代Taqman-MGB探针技术,建立特异敏感的实时荧光定量PCR方法,为弓形虫临床病原检测及弓形虫在犬各器官组织分布的特点研究提供技术支撑。方法针对弓形虫基因组中529-bp重复序列设计特异性引物和探针,建立一套基于Taqman-MGB探针技术的实时荧光定量PCR方法,验证方法的特异性、敏感性、重复性和灵敏度,对攻虫犬各组织器官进行荧光定量PCR检测。结果建立的Taqman-MGB探针实时荧光定量PCR方法,对弓形虫的检测具有高度的特异性,对柔嫩艾美尔球虫、犬心丝虫、犬细小病毒、狂犬病毒等微生物均无交叉反应。用重组质粒制作的标准曲线循环阈值与模板浓度有良好的线性关系。生成的标准曲线的相关系数为0.9996,斜率为-3.4132,弓形虫最低检测数为0.03个弓形虫速殖子,较国标弓形虫检测PCR方法灵敏度高1000倍。对于53份临床病犬组织样品的检测,所建立的方法弓形虫检出率为39.6%,而国标PCR方法弓形虫检出率为20.6%。利用此方法检测感染速殖子的5只比格犬各组织器官,发现弓形虫在脑、肺脏、肾脏及睾丸中更易检出,检出率为60%(3/5),其他组织器官阳性率为20%(1/5)。结论本研究建立了一种特异、敏感、快速的荧光定量PCR检测方法,并研究了弓形虫在比格犬中的分布特点,为犬弓形虫病的检测及未来犬弓形虫亚单位疫苗的效果评价提供理论基础。