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E731K FGFR2突变基因真核表达载体的构建

来源 :第八届全国医学生物化学与分子生物学、第五届全国临床应用生物化学与分子生物学、2013华东六省一市生物化学与分子生物学联合 | 被引量 : 0次 | 上传用户：wpaghq

【摘 要】

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目的：构建E731KFGFR2-3 ×FlagCMV真核表达载体,为研究E731K FGFR2突变基因的功能奠定基础。方法：采用定点突变试剂盒对正常人源FGFR2基因进行定点突变,携带有XhoI和XbaI酶切位点的PCR引物扩增目的基因,分别对胶回收PCR产物和3×FlagCMV表达载体进行双酶切,并切胶回收,T4DNA连接酶16℃连接过夜,转化感受态大肠杆菌DH5α,挑选克隆并进行菌落PCR,挑

【作 者】

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刘振兴 崔亚洲 栾静 周小艳 韩金祥 

【机 构】

：

山东省罕少见病重点实验室,山东省医药生物技术研究中心,卫生部生物技术药物重点实验室,山东省医学科学院,济南250062

【出 处】

：

第八届全国医学生物化学与分子生物学、第五届全国临床应用生物化学与分子生物学、2013华东六省一市生物化学与分子生物学联合

【发表日期】

：

2013年2期

【关键词】

：

E731K FGFR2 3×FlagCMV表达载体 

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　　目的：构建E731KFGFR2-3 ×FlagCMV真核表达载体,为研究E731K FGFR2突变基因的功能奠定基础。方法：采用定点突变试剂盒对正常人源FGFR2基因进行定点突变,携带有XhoI和XbaI酶切位点的PCR引物扩增目的基因,分别对胶回收PCR产物和3×FlagCMV表达载体进行双酶切,并切胶回收,T4DNA连接酶16℃连接过夜,转化感受态大肠杆菌DH5α,挑选克隆并进行菌落PCR,挑选其中阳性克隆送公司测序。

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