【摘 要】
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[目的]获得携带lsa(E)基因肠球菌新型接合转移质粒pY13的全核酸序列,并分析lsa(E)基因在其他肠球菌中的遗传背景和传播方式。[方法]2013年从猪场分离到7猪lsa(E)阳性肠球菌菌(粪肠球菌n=5,屎肠球菌n=1,鸡肠球菌n=1),通过S1-PFGE、Southern杂交、电击转化和重叠PCR等方法对lsa(E)基因的定位和基因环境进行分析；同时采用454 GS-FLX测序仪对pY13
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队,黑龙江哈尔滨150001
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨
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[目的]获得携带lsa(E)基因肠球菌新型接合转移质粒pY13的全核酸序列,并分析lsa(E)基因在其他肠球菌中的遗传背景和传播方式。[方法]2013年从猪场分离到7猪lsa(E)阳性肠球菌菌(粪肠球菌n=5,屎肠球菌n=1,鸡肠球菌n=1),通过S1-PFGE、Southern杂交、电击转化和重叠PCR等方法对lsa(E)基因的定位和基因环境进行分析；同时采用454 GS-FLX测序仪对pY13质粒进行序列全测定。[结果]最终获得了一个来自屎肠球菌全长为28489bp的pY13质粒。序列分析显示,pY13质粒携带一个新型的耐药簇,该耐药簇包含lnu(B)、lsa(E)、spw、 aadE、aphA3和两个拷贝的erm(B)基因。含有该耐药基因簇的质粒可介导林克酰胺类、大环内酯类、截断侧耳素、链阳菌素、壮观霉素和卡那霉素/新霉素等药物耐药。序列分析结果显示,在耐药基因簇的形成过程中插入元件ISEfa8和IS1256可能发挥了作用。另外,以pY13质粒为模板设计了9对重叠引物,对其他6株lsa(E)基因阳性菌进行PCR扩增,结果证实这6株菌携带的lsa(E)基因均位于pY13类似质粒上。[结论]首次获得了携带lsa(E)的肠球菌质粒pY13,虽然为非接合转移性质粒,但该类型的质粒仍然在多重耐药基因簇的传播中发挥了重要作用。
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