【摘 要】
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多不饱和脂肪酸(PUFA)需求及代谢途径是水生动物营养学的重要问题.本研究采用同源克隆和RACE技术,克隆了刺参多不饱和脂肪酸代谢中二十碳五烯酸(20：5n-3,EPA)和二十二碳六烯酸(22：6n-3,DHA)合成途径中的关键酶——脂肪酸去饱和酶(△6FAD)和延长酶(ELOVL5)基因的cDNA全长序列,采用荧光定量PCR测定了该基因在仿刺参成体组织和发育时期幼参组织中的表达差异.结果显示,A
【机 构】
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青岛农业大学生命科学学院,青岛,266109
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多不饱和脂肪酸(PUFA)需求及代谢途径是水生动物营养学的重要问题.本研究采用同源克隆和RACE技术,克隆了刺参多不饱和脂肪酸代谢中二十碳五烯酸(20：5n-3,EPA)和二十二碳六烯酸(22：6n-3,DHA)合成途径中的关键酶——脂肪酸去饱和酶(△6FAD)和延长酶(ELOVL5)基因的cDNA全长序列,采用荧光定量PCR测定了该基因在仿刺参成体组织和发育时期幼参组织中的表达差异.结果显示,Aj-△6fad基因的全长cDNA序列1735bp,编码463个氨基酸且拥有FAD超家族的所有特征.Aj-elovl5基因的全长cDNA序列1797bp,其中5UTR区域304bp,3UTR536bp,ORF为957bp,编码318个氨基酸,拥有ELOVL5蛋白序列的所有保守结构域.Aj-△6fad在成参肠道和雄性性腺中的有高的表达水平；Aj-elovl5基因在成参体壁、卵巢和呼吸树中表达水平较高.Aj-△6fad基因在附着后幼参的肠道和呼吸树中的表达量较高,特别是附着后100天和150天的肠道和呼吸树中表达量明显高于其它时期.Aj-elovl5基因也在肠道和呼吸树中的表达较高,并且在附着后100和250天表达量有明显增高.我们还进行了Aj△6fad和Aj-elovl5体外功能验证.首先分别构建了2个基因的毕赤酵母表达载体,在体系中加入相应的底物,然后用气质联用仪测定产物的生成.结果显示,Aj-△6fad基因的表达产物具有将α-亚麻酸(18：3n-3,LNA)和亚油酸(18：2n-6,LA)分别去饱和生成十八碳四烯酸(18：4n-3)和γ-亚麻酸(18：3n-6)的能力；同样,Aj-elovl5基因的表达产物具有将EPA碳链延长生成二十二碳五烯酸(C22：5n-3,DPA)的活性.
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克隆了湖南省蔬菜研究所选育的辣椒胞质雄性不育系9704A及其保持系9704B的顺乌头酸酶基因(ACO),并进行了时空表达分析,以探讨其表达与雄性不育的关系。在辣椒盛花期取造胞细胞增殖期、花粉母细胞减数分裂期、小孢子单核靠边期、成熟花粉粒期的花蕾提取RNA,用High Fidelity PrimeScript(@)RT-PCR Kit(TaKaRa)进行逆转录反应。根据GenBank上已报道的茄科植
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