目的：研究组织工程化喉软骨的构建方法。 方法：酶消化获取乳兔肋和关节软骨细胞并进行体外培养,传代时适当延长胰蛋白酶作用时间,收集第3～4代培养细胞用于实验；采用溶剂浇铸、模压成形和颗粒滤沥技术制备喉形态PHBHH生物支架材料塑形物,接种软骨种子细胞形成细胞-PHBHH复合物,体外共同培养l周,然后分别用网膜充填与包裹、腹内成形(n=9)和脊背部筋膜瓣与肌肉组织共同充填与包裹、皮下成形(n=9)的方法将负载软骨种子细胞的喉形态材料塑形物植入新西兰大白兔体内,设空白对照组(每批n=3)。术后一定时问取材,通过大体形态观察、组织学染色和免疫组织化学检测,对组织工程化喉软骨的成形与再生情况进行评估。 结果：获取的软骨种子细胞活性为(93±2)％,传统方法为(94±2)％(P>O.05)。制备的喉形态生物材料塑形物呈中空半面喇叭状,棱角分明,液体(乙醇)静态客积测量法测定其孔隙率>90％。扫描电镜结果表明材料与细胞黏附状况良好,分布均匀。2 种体内植入法均构建出喉形态组织工程化组织,大体形态维持良好,组织学和免疫组织化学均证实为软骨组织,且形态学和组织学表明两者基本一致。 结论：胰酶作用时间调整后收获的软骨种子细胞在有免疫力的动物体内成软骨效应良好,免疫排斥反应不明显；PHBHH可作为组织工程支架材料用于喉形态塑形物的塑形与组织工程化软骨的构建；网膜充填同包裹和肌肉与筋膜辨共同充填与包裹技术有利于组织工程化喉软骨的形成,具有临床应用潜力。