【摘 要】
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目的 研究电离辐射对乳腺癌细胞自噬性死亡的影响.方法 采用集落形成实验和CCK8试剂盒检测乳腺癌细胞MCF7长期和短期生存率情况,用流式细胞术检测了细胞凋亡率,MDC染色及
【机 构】
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吉林大学公共卫生学院 卫生部放射生物学重点实验室,吉林 长春 130021
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目的 研究电离辐射对乳腺癌细胞自噬性死亡的影响.方法 采用集落形成实验和CCK8试剂盒检测乳腺癌细胞MCF7长期和短期生存率情况,用流式细胞术检测了细胞凋亡率,MDC染色及GFP-LC3转染细胞检测自噬.WESTERN BLOT方法检测自噬和凋亡相关基因的蛋白表达情况.实时荧光定量PCR方法检测基因表达水平.结果 MDC染色结果显示,2,4,8Gy照射后可诱导MCF7细胞发生自噬性细胞死亡,并具有剂量依赖性,自噬发生最高点在照射后16小时左右.若照射前加入3MA(自噬特异性抑制剂)或Z-VAD-FMK(凋亡抑制剂)后,自噬的发生均被抑制.4,8Gy实效研究表明,照射后MAPLC3,P53,P21,BCL-2,TIGAR,DRAM,TP53INPI,beclin蛋白表达升高,AKT,bax,mTOR,p-mTOR蛋白表达降低.4Gy照射后,MAPLC3B基因表达明显升高.4Gy照射后,Bcl-2蛋白表达下降,照射前加入3MA, Z-VAD-FMK后,MAPLC3B基因表达明显降低Bcl-2蛋白表达量均升高,4Gy照射后AKT蛋白表达量明显降低,在照射前加入3MA,Z-VAD后,表达量均升高.结论电离辐射可诱导乳腺癌细胞自噬性细胞死亡,其机制涉及PI3K1/AKT、mTOR、PI3K Ⅲ/Beclin和P53/DRAM(TIGAR)等自噬调控的信号通路.
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