背景:CD1为非经典的MHC-I类分子,主要提呈脂类、糖脂类抗原给自然杀伤T细胞（NKT细胞）。CD1包括五类蛋白,其中CDld是唯一一类在人和鼠中都有表达的蛋白,并且在同源性及功能上均表现了高度的保守性。由于CDld-配体复合物结合NKT细胞的TCR,从而可以对NKT细胞进行鉴定及计数,所以CDld的多聚体可以作为研究NKT细胞的工具。本研究拟构建及表达人CD1d与IgGl-Fc段的融合蛋白,为以后研究NKT细胞提供基础。目的:人CDld/IgGl-Fc二聚体的构建、表达及鉴定。方法:利用相应的引物通过RT-PCR获得目的片段cDNA,通过重组技术获得CDld与IgGl-Fc的融合基因,并利用重组及时将此融合基因连入双表达载体pFastBac^TMDual的Ph启动子下游,将β₂m连入双表达载体pFastBac^TMDual的P10启动子下游,获得重组质粒。按照bac-to-bac昆虫表达系统操作说明,将重组质粒转化到DH10^TME coli,获得重组Bacmid杆状病毒质粒,利用cellfectin将重组杆粒转染到昆虫细胞中,重组杆粒经表达装配成含有目的基因的重组杆状病毒,收集重组杆状病毒,进一步感染昆虫细胞,收集上清,通过ELISA检测蛋白,收集表达量较高的那一代转染细胞的上清做后续实验。结果:经PCR、酶切以及测序鉴定证实插入的目的片段正确,经过针对IgG的ELISA检测表明上清中有约25ng/ml的蛋白表达。结论:成功构建出pFastBac^TMDual+[β₂m+CDld/IgGl-Fc]的质粒,并在昆虫细胞中表达。