【摘 要】
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目的:研究旨在揭示中药提取物肃毒星的体内外抗乙型肝炎病毒(HBV)作用及其相关作用机制.方法:以HepG2.2.15细胞(野生型HBV复制细胞系)和HepG2.A64细胞(恩替卡韦耐药型HBV复制细胞系)作为肃毒星抗HBV作用的体外评价模型;将携带1.3个拷贝HBV基因组信息的重组8型腺相关病毒经小鼠的尾静脉注射建立HBV小鼠体内评价模型.分别用荧光定量PCR、ELISA和免疫组化方法检测细胞HB
【机 构】
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北京,解放军302医院全军传染病研究所肝衰竭诊疗与研究中心 100039 北京金铭康生生物科技有限
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目的:研究旨在揭示中药提取物肃毒星的体内外抗乙型肝炎病毒(HBV)作用及其相关作用机制.
方法:以HepG2.2.15细胞(野生型HBV复制细胞系)和HepG2.A64细胞(恩替卡韦耐药型HBV复制细胞系)作为肃毒星抗HBV作用的体外评价模型;将携带1.3个拷贝HBV基因组信息的重组8型腺相关病毒经小鼠的尾静脉注射建立HBV小鼠体内评价模型.分别用荧光定量PCR、ELISA和免疫组化方法检测细胞HBV复制中间体和动物血清中HBV DNA水平,HBsAg和HBeAg水平和肝细胞原位HBcAg表达;用基因芯片技术分析肃毒星和恩替卡韦(ETV)药物处理HepG2.2.15细胞前后胞内基因的差异表达情况,流式细胞技术分析小鼠脾脏内T淋巴细胞的活化比例.
结果:①肃毒星(10.0 μg/mL)对HepG2.2.15细胞野生HBV和HepG2.A64细胞ETV耐药病毒复制、HBsAg、HBeAg水平的抑制率分别为75.1％、51.0％、 64.1％和65.2％、 42.9％、63.9％;ETV (10.0 μmol/L)的抑制率则分别为94.7％、36.6％、19.8％和52.7％、9.4％、14.7％.突变株对肃毒星和ETV的耐药倍数分别为1.2和712.5倍.②肃毒星组小鼠给药两周后血清HBV DNA下降1.39个Log值,HBsAg和HBeAg较给药前分别下降48.9％和51.7％;ETV组小鼠血清HBV DNA下降2.07个Log值,HBsAg和HBeAg则无明显下降.③差异表达基因KEGG通路分析发现肃毒星处理HepG2.2.15细胞后有10种差异表达倍数在2倍以上的胞内小分子蛋白参与HBV感染相关分子调节网络,抑制HBV复制,而ETV处理HepG2.2.15细胞后无相关分子的差异表达.④免疫组织化学结果显示肃毒星组小鼠HBcAg阳性的肝细胞数较对照组显著性减少.⑤流式细胞结果显示肃毒星组小鼠CD107a+CD3+CD8-,CD3+CD4+CD69+的T淋巴细胞比例较对照组显著性升高,而CD3+CD4+CD62L+的T淋巴细胞比例较对照组显著性降低.
结论:中药提取物肃毒星能在细胞和动物模型中有效抑制野生及ETV耐药HBV的复制和抗原表达,其机制涉及干扰HBV感染相关分子调节网络和活化宿主CD4+T细胞.
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