【摘 要】
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目的:基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)能够基于独特的质谱图纹来区别每一个细菌菌种,在普通细菌的快速鉴定中已被临床实验室应用。分枝杆菌由于独特的生长特
【机 构】
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同济大学附属东方医院南院医学检验科; Division of Clinical Microbiology,Mayo Clinic;
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目的:基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)能够基于独特的质谱图纹来区别每一个细菌菌种,在普通细菌的快速鉴定中已被临床实验室应用。分枝杆菌由于独特的生长特性和细胞成份,分离培养和菌株鉴定通常需要数周至数月。本研究旨在建立一种分枝杆菌全细胞蛋白试管提取方法,并评价MALDI-TOF-MS在非结核分枝杆菌快速菌种鉴定的应用价值。方法:①全细胞蛋白提取:以70%乙醇灭活菌体,0.1mm玻璃珠震击裂解细胞,甲酸和乙晴提取蛋白;②复苏128种非结核分枝杆菌ATCC标准菌株和57株临床分离株,提取蛋白于Bruker MicroflexTM质谱仪进行检测,MALDI Biotyper软件进行蛋白质特征指纹谱分析,建立标准菌株蛋白文库并进行临床分离株菌种鉴定。所有菌株均同时进行16SrDNA序列分析鉴定。结果:①MALDI-TOF-MS可在2.5小时内将90%的非结核分枝杆菌鉴定到种;②MALDI-TOF-MS鉴定非结核分枝杆菌ATCC标准菌株的准确率为92%,8%检出混合培养物,可能为保存过程的污染;③对临床菌株的鉴定:与16SrDNA序列分析比较,89.5%结果完全一致;16SrDNA序列不能鉴别到种的龟/脓肿分枝杆菌复合群、堪萨斯/胃分枝杆菌复合群、鸟/胞内分枝杆菌复合群用MALDI-TOF-MS可鉴定到种。结论:MALDI-TOF MS鉴定非结核分枝杆菌快速、准确、经济,可作为临床实验室非结核分枝杆菌菌种鉴定的一线选择方法。
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