【摘 要】
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根据鲑鱼降钙素基因的序列,合成了鲑鱼降钙素（sCT）基因。连接到pBluescripII质粒载体中.命名为pCAG164。用SacI和KpnI双酶切法分别切下目的基因和载体pW425t.通过低熔点琼脂糖回收、纯化目的基因和载体。用T4 DNA连接酶将sCT基因连接到载体pW425t中,转化ThyA基因缺陷的大肠杆菌X51。用PCR法和SacI/KpnI双酶切法筛选得到了阳性重组质粒pWCT.在载体
【出 处】
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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会
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根据鲑鱼降钙素基因的序列,合成了鲑鱼降钙素（sCT）基因。连接到pBluescripII质粒载体中.命名为pCAG164。用SacI和KpnI双酶切法分别切下目的基因和载体pW425t.通过低熔点琼脂糖回收、纯化目的基因和载体。用T4 DNA连接酶将sCT基因连接到载体pW425t中,转化ThyA基因缺陷的大肠杆菌X51。用PCR法和SacI/KpnI双酶切法筛选得到了阳性重组质粒pWCT.在载体上游设计了一条引物.用该引物对pWCT进行序列测定。结果表明.目的基因所编码的氨基酸序列与天然鲑鱼降钙素的氨基酸序列完全一致。采用电击转化法用pWCT转化ThyA基因缺陷型乳酸杆菌LaS107。筛选得到了阳性重组乳酸杆菌LaS318。应用放射免疫分析法.证明重组大肠杆菌和重组乳酸杆菌的培养上清中均含有降钙素,其中的重组降钙素（rCT）含量分别达到779ng/L和905ng/L.说明rCT可以分泌到大肠杆菌和乳酸杆菌的细胞外。
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