【摘 要】
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目的 研究抑癌基因PTEN(Phosphatase and Tensin Homolog Deleted on Chromosome ten)对参与DNA同源重组最重要基因rad51的调控作用及可能的机制.方法 使用实时定量PCR技
【机 构】
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军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京 100850
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目的 研究抑癌基因PTEN(Phosphatase and Tensin Homolog Deleted on Chromosome ten)对参与DNA同源重组最重要基因rad51的调控作用及可能的机制.方法 使用实时定量PCR技术检测PTEN野生型和缺陷型细胞rad51的表达水平；使用PI3K/Akt信号通路特异性抑制剂LY294002处理PTEN缺陷型细胞,实时定量PCR检测RAD51的表达情况；在PTEN野生型细胞中分别转染Flag-Akt WT(野生型Akt)和Flag-Akt AC(组成型激活Akt),在PTEN缺陷型细胞中分别转染Flag-PTEN WT(野生型PTEN)和Flag-Akt DN(失去激酶活性的Akt),分别使用RT-PCR和Western印迹技术检测RAD51在RNA和蛋白水平的表达变化；沉默PTEN缺陷型细胞的Akt后Western印迹观察RAD51表达变化；生物信息学分析和双荧光素酶报告系统确定FOXO3a是否是rad51基因的转录因子；观察PTEN缺陷与否对FOXO3a磷酸化的影响.结果 与野生型细胞相比,PTEN缺失后RAD51表达明显下降；LY294002处理PTEN缺陷型细胞后RAD51表达显著升高；PTEN野生型细胞转染Flag-Akt WT(野生型Akt)或Flag-Akt AC(组成型激活Akt)后RAD51表达下降；PTEN缺陷型细胞转染Flag-PTEN WT(野生型PTEN)和Flag-Akt DN(失去激酶活性的Akt)后RAD51表达升高；PTEN缺陷型细胞沉默Akt后RAD51表达升高；生物信息学分析FOXO3a可能是rad51基因的转录因子,双荧光素酶报告系统证明FOXO3a确实是rad51的转录因子.PTEN缺失会导致细胞核内FOXO3a磷酸化水平升高.结论 PTEN正向调节rad51的表达,PI3K/AKT/FOXO3a信号通路可能是其重要的调节方式之一.
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