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化橘红为芸香科植物化州柚Citrus grandisTomentosa或柚Citrus grandis(L)Osbeck的未成熟或近成熟的干燥外层果皮,具有镇咳祛痰的功效,是我国的传统道地药材.化州市绿色生命有限公司自2000年起在化橘红的道地产区广东化州市平定镇天堂嶂按照GAP的标准,种植化橘红26万株,占地1000hm2.但随着种植面积的扩大和种植年限的增加,病虫害问题日渐突出,曲牙土天牛(Dorysthenes hydropicus Pascoes)等害虫已对化橘红生产造成严重威胁.该基地气候湿热,适于昆虫病原真菌的生长,在调查中作者发现受真菌自然感染死亡的蜡蝉,说明基地环境中存在一定的昆虫病原真菌资源,本研究旨在从化橘红GAP基地土壤中分离、鉴定昆虫病原真菌,为进一步利用昆虫病原真菌防治化橘红害虫奠定基础.采用黄粉虫诱集法进行土壤虫生菌的诱集、分离,从基地不同类型小生境的40份土样中分离出19株昆虫病原真菌,依据其菌落及对黄粉虫的侵染特征,初步鉴定为绿僵菌(Metarhizium).扩增出各菌株ITS1-5.8S-ITS2 rDNA区域并测序,在Genbank上进行比对,结果表明所有分离到的菌株均为金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae.以Genbank登录的3株黄绿绿僵菌M.favoviriode作为外类群,金龟子绿僵菌4个变种菌株各2株,与基地菌株一起做系统树分析,结果显示金龟子绿僵菌与黄绿绿僵菌明显分为两个类群,金龟子绿僵菌的4个变种又各自分为不同的类群,基地分离的所有绿僵菌与金龟子绿僵菌小孢变种(M.anisopliae var.anisoplia)的2个菌株聚为一群.分离菌株的孢子大小也支持其为金龟子绿僵菌小孢变种,因此明确了各菌株均为金龟子绿僵菌小孢变种,最终说明化橘红GAP基地环境适于绿僵菌生存,土壤中拥有丰富的绿僵菌资源,这为进一步利用绿僵菌防治化橘红害虫奠定基础.