论文部分内容阅读
细胞因子(Cytokine)是一类由活化的免疫细胞(淋巴细胞、单核巨噬细胞等)和相关细胞(纤维细胞、内皮细胞等)产生的具有高活性的、多功能的多肽分子或糖蛋白,它们通过与特异性受体的结合,在低浓度下发挥免疫调节功能。另外细胞因子在抗感染、抗肿瘤、抗排斥反应和自身免疫疾病治疗以及机体造血等方面具有重要作用。近年来,随着细胞因子研究的日新月异,人们发现将重组细胞因子作为疫苗佐剂使用,不仅能特异性的增强疫苗的免疫效果,而且可增强机体抗感染的能力。DNA疫苗是近年来发展起来的一种新型疫苗,研究发现细胞因子能显著增强DNA疫苗的免疫效果。但细胞因子一般不稳定很容易失活,且使用剂量很难掌握,提取的或重组表达的细胞因子因其诸多方面的缺陷,较难满足新型疫苗的需要。若将编码细胞因子基因的表达质粒直接作为佐剂在体内持续低水平表达可避免这些缺点,还省去了表达、纯化等繁琐的工艺过程。本研究在大量克隆猪重要细胞因子基因的基础上,有目的地选择猪IL-4、IL-6、IFN-γ和CD58等基因构建其动物细胞表达重组质粒,与猪囊尾蚴抗原和猪口蹄疫病毒颗粒抗原或疫苗配伍免疫小鼠,探讨其免疫佐剂效应,为猪分子疫苗新型免疫佐剂的研究奠定基础。试验表明:这些细胞因子重组质粒均能够在小鼠体内表达,诱导机体产生较强的免疫应答,无论对猪囊尾蚴抗原还是猪口蹄疫抗原都有免疫佐剂效应,但引起免疫应答的强度和类型可能与抗原和细胞因子的种类有关。在囊尾蚴虫体抗原,重组CD58和IL-6质粒免疫增强抗体的能力较IFN-γ和IL-4强,而在口蹄疫病毒抗原,IL-4和IFN-γ的免疫增强抗体滴度的能力较IL-6和CD58强,也是标准疫苗滴度6倍。在各种重组质粒诱导免疫小鼠脾细胞分泌IL-4和IFN-γ方面:猪重组IL-4和IL-6对猪囊尾蚴抗原诱导脾细胞分泌鼠IL-4的能力较强,其分泌量高达50pg以上,而重组CD58的诱导分泌IL-4的能力较低,这与其诱导的抗体水平的结果不吻合;在诱导分泌鼠IFN-γ方面,猪重组IL-4也显示较高的活性,而猪重组IFN-γ没有显示出其优越性。在猪口蹄疫抗原,也是猪重组IL-4和IL-6诱导脾细胞分泌鼠IL-4的能力较强,但整体水平均略低于猪囊尾蚴抗原试验;在分泌鼠IFN-γ方面,猪重组IL-4和IFN-γ显示出特别高的活性,其中猪IL-4诱导分泌鼠IFN-γ的量高达4000pg以上。综合两种抗原看,这几种重组细胞因子质粒在猪囊尾蚴抗原普遍诱导的鼠IL-4含量较高而鼠IFN-γ含量较低,标志着体液免疫应答水平较高,细胞免疫应答水平较低,而这种现象在口蹄疫抗原正好与之相反。这可能与抗原的类型、检测细胞因子的时间以及体内表达的异源细胞因子与自身产生的细胞因子的相互调节作用等因素有关,需进一步研究和证实。