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2013年6月,某动物园两只同窝驯养东北虎幼虎相继死亡.剖检尸体,均表现为双侧肾脏肿大,脑组织水肿.从内脏中分离获得2株革兰氏阴性杆菌,经细菌的形态特征、培养特性、Phoenixl00细菌鉴定仪及分子生物学鉴定,确认2株细菌是奇异变形杆菌,其rpoB基因序列与奇异变形杆菌标准参考株HI4320(AM942759)的同源性为gg.g％.经Denis线特性检测以及Rep/ERIC和PFGE分型分析,确认从两只幼虎中分离到的2株细菌为同一株奇异变形杆菌.该菌携带β-内酰胺类耐药基因CTX-M-9和奇异变形杆菌致病岛ICEpml,具有较强的毒力和耐药性,能致死小白鼠,死亡小鼠出现脑水肿病理变化.本试验是首次从患病虎内脏中分离到奇异变形杆菌,为今后相关传染病的病因分析诊断、流行病学调查、疾病防治等提供了参考依据,也为奇异变形杆菌致病性等方面的研究提供了可借鉴的方向.
本次病例中,从两只同窝东北虎幼虎中分别分离到奇异变形杆菌.首先对细菌进行了生化和分子生物学鉴定,其中rpoB基因编码细菌RNA聚合酶p亚基,rpo基因普遍存在于细菌染色体上,在长期进化过程中具有高度保守性.当16S rRNA不易区分亲缘关系较近的菌种时,可利用rpo基因进行区分.
本次试验用细菌表现型和分子生物学方法对两株细菌进行了同源性鉴定.Dienes检测是专门用来鉴定奇异变形杆菌的遗传差异的方法,其方法依赖于奇异变形杆菌在固体琼脂平板上的迁移生长特性,当两株有遗传差异的菌在迁移时,在迁移交汇处会相互抑制而出现肉眼可见的分界线,即Dienes线;反之,没有遗传差异的菌株在迁移交汇处会相互融合,不出现Dienes线.Rep/ERIC-PCR是根据所有细菌,包括不同种属以及同种细菌的染色体上一段重复序列设计的PCR检测方法,真细菌的基因组中分散存在DNA重复序列,主要包括基因外重复回文序列(Repetitive Extragenic Palindromic,REP)、肠杆菌基因间重复一致序列(Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus.ERIC),它们在进化过程中高度保守,因此在菌株、种、属水平上都有明显的分布差异.1996年,REP、ERIC-PCR作为一种细菌基因组指纹分析方法,被用于细菌基因组间的差异分析.由于不同菌株该重复序列的长度不同,因此可以作为一种用来鉴定两株细菌同源性的方法,而PFGE方法是目前临床常规的细菌溯源方法.通过以上方法的鉴定结果表明,两株细菌为同一株奇异变形菌,并感染了同窝的两只幼虎.
为了明确两只幼虎的死因,同时进行了部分病毒学检测.死亡虎出现了腹泻和脑水肿的病理症状,所以针对其腹泻症状进行了猫细小病毒、针对脑水肿症状进行了A型流感病毒、狂犬病病毒和乙型脑炎检测,结果均为阴性.虽然在两只幼虎中分离获得了同一株奇异变形杆菌且未检测到部分可疑病毒,但是由于无法进行回归试验复制该病,该菌在本次病例中起到了重要作用.
通过此次分离鉴定工作,获得了一株具有较强致病性和耐药性,可使幼虎发生感染的奇异变形杆菌.由于奇异变形杆菌在环境中广泛存在,感染该菌后动物内脏器官受损、机体免疫力下降、病死率增加.因此,在日常饲养管理中要加强预防,严控饲料来源和水源,科学规划饲养密度,严格执行病健动物的隔离饲养,减少继发感染的机率.当确定感染奇异变形杆菌后,可用氨基糖苷类和青霉素类药物进行治疗.