【摘 要】
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目的：通过对人Eg5头区cDNA逆行克隆、表达及产物纯化、活力的初步鉴定，为未来的抗肿瘤药物的高通量筛选获得足够董的靶标蛋白打下了基础。方法：提取HJ60细胞总RXA，通过RT-PCR获得包括头区的386个氦基骏长的cDNA，构建原核表达质粒，转化大肠杆菌诱导表达蛋白。分离纯化、检验ATP酶的活性和阳性药物的抑制效果。结果：测序证实克隆得到的序列完全正确。SDs—PAGE检测纯化后的蛋白分子量在4
【机 构】
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中国药科大学生命科学与技术学院 南京 210009
【出 处】
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沪、苏、闽暨全军生物技术药物研讨会
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目的：通过对人Eg5头区cDNA逆行克隆、表达及产物纯化、活力的初步鉴定，为未来的抗肿瘤药物的高通量筛选获得足够董的靶标蛋白打下了基础。
方法：提取HJ60细胞总RXA，通过RT-PCR获得包括头区的386个氦基骏长的cDNA，构建原核表达质粒，转化大肠杆菌诱导表达蛋白。分离纯化、检验ATP酶的活性和阳性药物的抑制效果。
结果：测序证实克隆得到的序列完全正确。SDs—PAGE检测纯化后的蛋白分子量在45kD左右，于预期的分子量相吻合。阳性药物对ATP酶的活力有抑制作用。
结论：重组HEg5的制备过程可行，能用基因工程的方法大量生产。ATPa se的活力能被阳性药物所抑制。
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