【摘 要】
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本研究通过柑橘裂皮类病毒(Citrus exocortis viroid, CEVd)登录在数据库中187条序列比对,选取较保守的核苷酸位置即左端区、中央保守区和右端区设计了剪切靶标核酸正链
【机 构】
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农业微生物国家重点实验室,华中农业大学植物科技学院,武汉430070
【出 处】
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中国植物病理学会第十一届青年学术研讨会
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本研究通过柑橘裂皮类病毒(Citrus exocortis viroid, CEVd)登录在数据库中187条序列比对,选取较保守的核苷酸位置即左端区、中央保守区和右端区设计了剪切靶标核酸正链和负链的丁型肝炎病毒核酶和DNA核酶,结果显示,对于靶标RNA正-链,所设计的6个HDV核酶(即HDVRz-24、86、169、178、260和344)的剪切效率为8.0%~12.8%,没有显示具有生产应用潜力的核酶.所设计的DNA核酶(即DNARz-5、16、22、160、272和365)剪切效率为6.6%~14.0%,从目前结果推测,CEVd正链结构紧凑,不适宜作为核酶剪切的靶标链.基于靶标负链核酶体外剪切结果显示,所合成的HDV核酶HDV Rz(-)11、24、89、106、185、190和360的剪切效率为2.2%~10.2%,核酶HDV Rz(-)342的剪切效率为63.1%.所合成的Dna核酶DNA Rz(-)214和DNA Rz (-)365剪切效率分别为0%和2.7%,而DNA Rz(-)334和DNA Rz(-)343的剪切效率为70.2%和71.1%.对比HDV核酶和Dna酶靶标位点剪切效率,两者均在TL区的下链具有较高的剪切效率,达到63%以上,这说明,在负链的334-343区域,是理想的核酶剪切位点.该阶段筛选出了具有较高体外剪切活性的核酶HDV Rz(-)342、DNA Rz(-)334和DNA Rz(-)343,并对其进行了酶动力分析,为进一步采用核酶进行CEVd 的防治奠定了基础.
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