【摘 要】
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根据Genbank上发表的牛IL-15基因序列设计并合成了特异性引物，以经LPS和ConA刺激的牛外周血单个核细胞提取的总RNA为模板，用RT-PCR方法扩增出长度约500bp的目的基因片段，并将该基因克隆到pMD18-T载体上。酶切、PCR及序列测定结果表明，获得了牛IL-15全长基因的克隆。进一步通过PCR方法得到缺失其N端48 aa的信号肽序列的牛IL-15成熟蛋白基因，将其亚克隆到原核表达
【机 构】
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华南农业大学兽医学院,广东广州 510642;苏州大学医学院微生物学教研室,江苏苏州 215123
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会
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根据Genbank上发表的牛IL-15基因序列设计并合成了特异性引物，以经LPS和ConA刺激的牛外周血单个核细胞提取的总RNA为模板，用RT-PCR方法扩增出长度约500bp的目的基因片段，并将该基因克隆到pMD18-T载体上。
酶切、PCR及序列测定结果表明，获得了牛IL-15全长基因的克隆。进一步通过PCR方法得到缺失其N端48 aa的信号肽序列的牛IL-15成熟蛋白基因，将其亚克隆到原核表达载体pET-32a上，构建重组表达质粒pET-IL-15，转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导，该菌表达以包涵体形式存在的大小约为33ku的融合蛋白。用Nj螯合层析方法纯化表达的蛋白。
Western blot试验显示表达的重组融合蛋白能与抗6xHis的单克隆抗体发生反应，同时也能与鼠抗猪IL-15的多克隆抗体发生明显交叉反应。牛IL-15基因的克隆、表达为进一步研究其功能和应用奠定了基础。
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