禽大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌(Avian Pathogenic Escherichia coli,APEC)引起的一种人畜共患传染病,给养禽业的发展带来了严重的危害,并可威胁公共卫生安全,因其致病机理复杂、血清型多、分布广泛,对其有效防控难度较大。细菌非编码小RNA(small non-coding regulatory RNA,sRNA)作为细菌基因组中非编码蛋白质的基因片段,其在转录后却可调节细菌多个基因的表达,影响多种细菌毒力。目前sRNA 与APEC 毒力相关的靶mRNA 以及对APEC 毒力的影响尚未见报道,本实验选择APEC 非编码小RNA(RyhB)为研究对象开展下列研究：实验一、APEC 的RyhB 缺失株及回复株的构建本实验应用Red 同源重组技术,运用overlap 的方法,扩增出RyhB 同源重组片段。将所得片段电转入含PKD46 的出发株,将PCP20 质粒电转入阳性菌株经PCR 验证,同步将RyhB 基因扩增片段和pSTV28 双酶切后连接并转化至DH5α感受态细胞中,筛选阳性克隆。将回复质粒pSTV28-RyhB电导入△RyhB,经CM 抗性筛选获得回复株并经PCR 验证。