【摘 要】
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根据本实验室构建的pMD19-T-Gal-1序列,参照酵母密码子的偏好性,设计合成Gal-1成熟肽片段新基因,并在其3端添加6×His序列以检测Gal-1的表达情况.将合成的目的基因克隆入分泌
【机 构】
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江苏省家禽科学研究所,家禽遗传育种重点实验室,江苏扬州 225003
【出 处】
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第七届中国优质禽育种与生产研究会学术讨论会暨代表大会
论文部分内容阅读
根据本实验室构建的pMD19-T-Gal-1序列,参照酵母密码子的偏好性,设计合成Gal-1成熟肽片段新基因,并在其3端添加6×His序列以检测Gal-1的表达情况.将合成的目的基因克隆入分泌型表达载体pPIC9K载体中,构建表达载体pPIC9K-Gal-1-His.pPIC9K-Gal-1-His经Sal Ⅰ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株GS115,G418抗性筛选,得到高拷贝转化子,经PCR检测Gal-1-His基因与毕赤酵母染色体稳定整合.阳性克隆用甲醇诱导,Tricine-SDS-PAGE分析和Western-blotting鉴定表达上清液,结果在约6KD处可见特异性条带,可见鸡β-防御素-1基因已成功整合到酵母细胞基因组中并获得表达.该研究将为Gal-1的高效表达和生物学活性研究奠定基础.
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