【摘 要】
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目的：设计构建表达溶血磷脂酸(LPA)受体Edg7基因的小分子干扰RNA(siRNA)慢病毒载体并转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞，初步观察沉默Edg7基因表达对卵巢癌细胞生长的抑制效应。方法：设计针对人Edg7基因的siRNA靶序列，合成发夹样DNA序列，退火成双链DNA。先克隆到pGEM-T Easy克隆载体(pGEM-T Easy)，再亚克隆至真核表达载体(pRNAT-u6.1/lenti质粒
【机 构】
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郑州大学第一附属医院妇产科 450052 郑州大学基础医学院微免教研室 450052
【出 处】
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2008年全国妇产科围手术期相关问题及治疗并发症学术研讨会
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目的：设计构建表达溶血磷脂酸(LPA)受体Edg7基因的小分子干扰RNA(siRNA)慢病毒载体并转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞，初步观察沉默Edg7基因表达对卵巢癌细胞生长的抑制效应。
方法：设计针对人Edg7基因的siRNA靶序列，合成发夹样DNA序列，退火成双链DNA。先克隆到pGEM-T Easy克隆载体(pGEM-T Easy)，再亚克隆至真核表达载体(pRNAT-u6.1/lenti质粒)，经PCR技术鉴定及DNA双向测序证实其序列无误后，包装表达Edg7siRNA序列的慢病毒并转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞，用荧光显微镜观察重组慢病毒对SKOV3细胞的转染率，采用实时荧光定量PCR检测转染后SKOV3细胞中Edg7 mRNA的表达，Westemblot测定转染后蛋白表达的变化。生化法测定细胞上清液中LPA含量变化，流式细胞仪检测细胞凋亡率。以未转染细胞和空载体包装的慢病毒转染细胞作为对照。
结果：经PCR技术鉴定及DNA双向测序证实重组真核表达载体目的基因的序列与设计完全符合(命名为pRNAT-U6.1/lenti-siEdg7)，包装出高浓度表达目的基因的慢病毒。对SKOV3细胞转染率为92％;实验组慢病毒转染后SKOV3细胞的Edg7 mRNA和蛋白表达水平明显下降(P<0.05)，SKOV3细胞上清液中LPA的含量明显降低(P<0.05)，细胞的凋亡率明显增加(P<0.05)。
结论：成功构建了针对人Edg7基吲的siRNA慢病毒载体，并能高效转染卵巢癌SKOV3细胞，抑制Edg7基因表达;沉默Edg7基因表达能诱导卵巢癌细胞凋亡，抑制肿瘤细胞生长。
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