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【目的】应用L-02肝细胞系建立长期低剂量镉转化细胞模型。观察镉转化细胞形态学变化,检测转化细胞增殖,凋亡和甲基化的改变,探讨长期低剂量镉导致细胞转化的机制。【材料和方法】1μM氯化镉培养L-02细胞10周建立镉转化细胞系,经形态学观察、台盼蓝染色计数法和细胞克隆形成检测转化细胞的增殖率,倍增时间和克隆形成率;Transwell检测转化细胞的迁移侵袭能力;流式细胞术检测转化细胞的周期,ROS水平和凋亡率的变化等实验鉴定模型。随后进行镉转化细胞实验:L-02细胞组,CDT-L-02组(镉转化细胞),L-02细胞+5-aza组,CDT-L-02+5-aza组。台盼蓝染色计数法检测各组细胞的增殖率;流式细胞术检测各组细胞凋亡率的变化;WesternBlot检测各组细胞DNMTs,凋亡和周期相关蛋白以及PCNA表达的变化;限制性内切酶酶切电泳和MSP检测各组细胞基因组DNA甲基化和caspase-8基因启动子甲基化的水平。然后进行肝癌细胞系HepG-2细胞相关实验,L-02细胞组,CDT-L-02组,HepG-2组,HepG-2+5-aza组。台盼蓝染色计数法检测甲基化抑制剂5-aza处理后肝癌细胞HepG-2活性;MSP检测5-aza处理后肝癌细胞HepG-2caspase-8启动子甲基化的水平;WestemBlot检测5-aza处理后肝癌HepG-2细胞系DNMT1,caspase-8的蛋白表达。【结果】镉转化细胞模型细胞形态从方形变成长梭形,与正常对照组相比,转化细胞DNMT1表达稳定升高,Caspase-8表达稳定下降,p<0.05。与正常对照组L-02细胞相比,转化细胞的增殖率,克隆形成率和迁移侵袭能力明显升高,p<0.05;镉转化细胞在甲基化抑制剂5-aza的作用下,与正常对照组相比,升高的增殖率明显下降,减少的凋亡率明显增加,p<0.05;DNMTs,Caspase-8与其他凋亡和周期相关蛋白的表达在5-aza的作用下恢复到正常对照组的水平,p<0.05;基因组和caspase-8基因启动子甲基化的水平也有所恢复。在肝癌细胞系实验中,5-aza作用48h,与HepG-2组相比HepG-2+5-aza组的细胞活性明显下降,p<0.05;DNMT1表达减少,Caspase-8表达增加,p<0.05;与正常L-02细胞相比,肝癌细胞HepG-2caspase-8基因启动子甲基化水平较高,5-aza的作用使肝癌细胞HepG-2caspase-8基因启动子甲基化水平下降。【结论】长期低剂量镉能促进正常肝细胞L-02增殖增加,凋亡减少,并改变细胞的形态,导致正常细胞发生转化,其可能的机制为增加了整体基因组DNA和caspase-8基因启动子甲基化的水平。同时研究表明肝癌细胞的恶性增殖也与caspase-8基因启动子异常甲基化有关。