【摘 要】
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通过磁珠富集的方法分离池蝶蚌(Hyriopsis Schlegelii)的微卫星分子标记.将池蝶蚌基因组DNA酶切,切胶回收200-1000bp大小的片段并纯化,连接Brown接头,采用PCR技术富集,并
【机 构】
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南昌大学生命科学与食品工程学院 南昌330031
【出 处】
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第八届南方六省(粤、湘、鄂、赣、桂、琼)动物学学术研讨会
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通过磁珠富集的方法分离池蝶蚌(Hyriopsis Schlegelii)的微卫星分子标记.将池蝶蚌基因组DNA酶切,切胶回收200-1000bp大小的片段并纯化,连接Brown接头,采用PCR技术富集,并用生物素标记的寡核苷酸(AC)12等探针与其杂交,杂交复合物结合到包被有链霉亲和素的磁珠上,再将这些片段洗脱,PCR扩增,克隆构建含有微卫星片段的“基因组文库”,所得到的阳性克隆进行测序.从所获得的212个阳性克隆中选取110个进行测序,其中54.5％含有微卫星序列,80％的重复序列重复数在10以上,微卫星序列中21.4％为完美型.除探针中使用的AC、AG等重复单元外,还观察到CT、GA、ATG等重复序列.设计获得60对微卫星引物,合成其中的30对经PCR筛选,结果有10对引物扩增出多态性条带.该实验表明：磁珠富集法是获得池蝶蚌微卫星分子标记的一种有效的方法,同时,制备出的微卫星标记可为今后研究池蝶蚌分子遗传多样性提供有用的遗传标记.
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