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目的:基于钙调神经磷酸酶/活化T细胞核因子2(CaN/NFATc2)信号通路研究蛇床子素(Ost)抗肺动脉高压(PAH)的作用机制。方法:(1)在体实验:将健康雄性SD大鼠(280-300 g)60只,随机分为6组:空白对照组(Control,n=10)、模型组(Model,n=10)、Ost低、中、高剂量组(Ost-L、Ost-M、Ost-H,5、10、20 mg/kg,ig,qd,n=10)、环孢素A(CsA)组(1 mg/kg,ig,qd,n=10)。适应性喂养一周后,除空白对照组外其余大鼠均经颈背部皮下注射野百合碱55 mg/kg建立PAH模型,两周后开始给药,其中Ost低、中、高剂量组和CsA组分别给予Ost、CsA持续灌胃两周,空白对照组和Model组给予等体积溶媒。给药两周后右心导管法检测肺动脉压;称大鼠体重(BW),肺湿重(LW),计算肺湿重指数(LI=LW/BW);HE染色观察肺动脉血管形态学变化;采用Western Blot检测肺组织PCNA、CaN、NFATc2、Kv1.5、Cyt C、Caspase 9、COX-2、IL-6、IL-1β、TNF-a、MCP-1的蛋白表达。(2)离体实验:采用酶联合消化法提取大鼠原代肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),观察细胞生长形态,免疫荧光法对第3代PASMCs进行鉴定;实验分5组:正常对照组、血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)组、PDGF-BB+Ost(5、10、20μM)组,PDGF-BB浓度均为25 ng/mL。培养24 h后,CCK-8法检测各组PASMCs增殖活力,采用Western Blot检测PASMCs中PCNA、CaN、Kv1.5、Cyt C、Caspase 9的蛋白表达。结果:(1)在体实验:与空白对照组相比,Model组平均肺动脉压和肺湿重指数显著增加(P<0.05);HE染色可见肺小动脉中膜平滑肌明显增生,管腔狭窄,内弹力板挤压呈“波浪状”;肺组织中胞核、胞浆的NFATc2蛋白表达增加(P<0.05);肺组织PCNA、CaN、COX-2、IL-6、IL-1β、TNF-a、MCP-1的蛋白表达增加(P<0.05),Kv1.5、Cyt C、Caspase 9的蛋白表达降低(P<0.05)。与Model组相比,Ost(10、20 mg/kg)和CsA(1 mg/kg)组平均肺动脉压、肺湿重指数明显降低(P<0.05);肺小动脉平滑肌增生和管腔狭窄程度均有所改善;肺组织胞核、胞浆NFATc2的蛋白表达降低(P<0.05);肺组织PCNA、CaN、COX-2、IL-6、IL-1β、TNF-a、MCP-1的蛋白表达降低(P<0.05),Kv1.5、Cyt C、Caspase9的蛋白表达增加(P<0.05)。(2)离体实验:与正常对照组相比,PDGF-BB组PASMCs的增殖活力增加,PCNA、CaN的蛋白表达增加(P<0.05);与PDGF-BB组相比,Ost(10、20mM)组PDGF-BB诱导的PASMCs增殖活力降低,PCNA、CaN的蛋白表达降低(P<0.05)。与正常对照组相比,PDGF-BB组Kv1.5、Cyt C、Caspase 9的蛋白表达降低(P<0.05);与PDGF-BB组相比,Ost(10、20mM)组PASMCs中Kv1.5、Cyt C、Caspase 9的蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论:Ost具有抗PAH的作用,其机制可能与抑制CaN/NFATc2信号通路有关。