以多肽为基础的亲和标签和检测试剂的开发,在生物检测和相关医药产品的制备过程中受到越来越多的重视。根据已有的研究[1,2],早先我们设计了Fc-III靶向蛋白表达系统作为蛋白检测和纯化的一个新的手段[3,4]。目前,我们在此基础上进行延伸,设计合成了新的环肽Fc-III-4C[5],通过二级质谱确认该环肽通过4个半胱氨酸残基形成稳定的双环结构(图1a)。同时通过相关实验验证了该亲和标签的特性,并以此为基础发展了蛋白纯化及蛋白检测系统。实验表明,Fc-III-4C与Ig G蛋白的亲和能力高于蛋白A/G,同时不具有物种特异性,能够与多物种的IgG蛋白结合。并且固定在琼脂糖基质上的Fc-III-4C,无论是在稳定性和可重复性上均高于固定后的蛋白A/G。在以碳酸酐酶作为模式蛋白验证Fc-III-4C融合蛋白表达纯化系统时发现:其作为亲和标签,不仅能使融合后的目的蛋白达到90%的纯化效率,同时不会对碳酸酐酶的功能和结构产生影响,此外,对于碳酸酐酶而言,Fc-III-4C可能通过捕获金属离子,以增强其酶活。进一步实验表明,Fc-III-4C能够与Zn2+、Cu2+、Ni2+和Co2+结合(图1b),表明融合Fc-III-4C后,可能会增强以这些金属离子作为辅助因子的蛋白酶活。在蛋白检测方面,我们将Fc-III-4C与FITC结合,合成了一种新的免疫荧光试剂,准确检测到了细胞内的目的蛋白。因此,Fc-III-4C标签在重组蛋白表达纯化及蛋白检测方面均有广泛的应用前景。