【摘 要】
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目的探讨人脂肪间充质干细胞(Human adipose tissue-derived stem cells,hASCs)对多发性硬化(Multiple sclerosis,MS)患者外周血Th17细胞的免疫调控作用机制。方法从抽脂手术
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目的探讨人脂肪间充质干细胞(Human adipose tissue-derived stem cells,hASCs)对多发性硬化(Multiple sclerosis,MS)患者外周血Th17细胞的免疫调控作用机制。方法从抽脂手术患者中得到废弃的脂肪组织,分离、纯化hASCs。采用密度梯度离心法分离MS患者外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cells,PBMCs),选用免疫磁珠分选CD4+T细胞,体外向Th17细胞刺激极化,并加入不同比例的hASCs(hASCs:CD4+T分别为1:4、1:10)共培养4d,并设立添加anti-LIF组;流式细胞术检测共培养后Th17细胞占CD4+T细胞的比例,RT-PCR检测CD4+T细胞表面受体IL-6R、IL-23R、LIFR,核转录因子RORγt以及hASCs LIF mRNA水平变化;ELISA法检测共培养体系上清液中LIF的表达。探讨hASCs对MS的Th17细胞免疫调节作用可能的机制。结果分离的hASCs流式细胞术鉴定可基本判定为hASCs;PBMCs经免疫磁珠法分选后CD4+T细胞纯度高达90%以上;共培养后,1:4组、1:10组中Th17细胞占CD4~+T细胞的比例下降,且存在高浓度抑制效应;RT-PCR分析发现CD4+T细胞共培养后RORγt、IL-6R、IL-23R mRNA的表达水平下降,LIFR及hASCs细胞LIF mRNA表达水平均升高;加入anti-LIF后,Th17细胞比例回升至对照组水平;RT-PCR分析RORγt、IL-6R mRNA的表达水平回升;ELISA检测各组LIF的水平发现,共培养组LIF分泌均较CD4+T、hASCs增多,加入anti-LIF后明显减少;以上结果均有统计学意义(P<0.05)。结论 hASCs可抑制MS患者Th17的分化,其作用可能与其分泌LIF,通过IL-6/LIF轴竞争性抑制有关。
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