【摘 要】
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目的：构建轮枝链霉菌Streptoverticillium mobaraense转谷氨酰胺酶(Transglutaminase,TGase)基因毕赤酵母GS115分泌型表达载体,表达重组转谷氨酰胺酶.方法：通过PCR的方法从
【机 构】
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中国科学院上海生命科学研究院,中科院合成生物学重点实验室,上海200233
【出 处】
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第三届全国酶制剂研究开发应用技术研讨会
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目的：构建轮枝链霉菌Streptoverticillium mobaraense转谷氨酰胺酶(Transglutaminase,TGase)基因毕赤酵母GS115分泌型表达载体,表达重组转谷氨酰胺酶.方法：通过PCR的方法从轮枝链霉菌基因组中获得转谷氨酰胺酶全长基因DNA片段,将目的基因插入酵母表达载体pPICZαA结合因子分泌信号下游,得到重组载体pPICZαA-TGase.SaclI线性化后电转化毕赤酵母GS115,PCR鉴定目的基因,筛选转化酵母菌.阳性转化子经摇瓶表达,取上清TCA沉淀后做SDS-PAGE电泳分析并检测转谷氨酰胺酶的活力.结果：经测序及PCR-实,转谷氨酰胺酶基因准确插入酵母表达载体pPICZαA中,转化后重组载体通过同源重组整合进入酵母基因组中.SDS-PAGE分析证明重组转谷氨酰胺酶的分子量约为45kD,测得培养基中转谷氨酰胺酶的酶活为4.2U/mg蛋白.结论：成功构建出酵母表达载体pPICZαA-TGase,在培养基中获得分泌表达的重组转谷氨酰胺酶,测得纯化后得到的TGase蛋白的酶活可以达到4.2U/mg蛋白.
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