论文部分内容阅读
目的:构建奶山羊β-乳球蛋白基因置换型敲除裁体，为获得β-乳球蛋白基因缺失型细胞株奠定实验基础
方法:根据已知的β-乳球蛋白序列设计引物，通过PCR技术克隆同源臂序列，5’端同源臂2264bp，包括外显子1，3’端同源臂4451bp，包括全部的外显子3、4、5、6、7，分别连入克隆载体pMD18-T Simple载体中并测序.然后以含有正负筛选标记基因的ploxpⅡ载体为基础，将5’端和3’端同源臂片段先后连入其中，进行酶切、PCR鉴定.将构建好的基因敲除载体转化组成型表达Cre酶的大肠杆菌BM25.8，验证Loxp序列的生物活性.
结果:PCR扩增得到了组成β-乳球蛋白基因敲除载体的2个同源臂片段，分别构建成重组克隆载体和β-乳球蛋白基因敲除载体PBLG2T，PBLG2T载体中的正选基因可以被CRE重组酶去除
结论:PBLG2T基因敲除载体构建成功，并能在打靶成功后用Cro重组酶去除基因组中插入的neo基因，为获得BLG基因型缺失细胞提供前提条件.