【摘 要】
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[目的]为构建金黄色葡萄球菌黏附素基因原核表达质粒,[方法]采用PCR方法对凝集因子A(ClfA)的A区、纤连蛋白(FnBPs)A和B的D区基因进行特异性扩增,[结果]构建了克隆质粒pMD
【机 构】
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甘肃农业大学动物医学院,兰州730070
【出 处】
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中国畜牧兽医学会第三届中国兽医临床大会
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[目的]为构建金黄色葡萄球菌黏附素基因原核表达质粒,[方法]采用PCR方法对凝集因子A(ClfA)的A区、纤连蛋白(FnBPs)A和B的D区基因进行特异性扩增,[结果]构建了克隆质粒pMD 19T-ClfA、pMD 19T-FnBPA和pMD 19T-FnBPB,然后将克隆基因定向插入到原核表达载体pET32a(+)中,构建了表达质粒pET32-ClfA、pET32-FnBPA和pET32-FnBPB,并将其转入宿主菌BL21 (DE3),经SDS-PAGE分析表明,经1 mmol/L IPTG诱导后,在57ku、35ku和35ku处出现了与目的蛋白一致的外源蛋白带；经western-blot分析表明,所表达的蛋白均与目的蛋白一致,[结论说明外源基因成功表达,且表达产物具有良好的反应原性。
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