【摘 要】
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目的：黄连解毒汤(HLJDT)出自《外台秘要》,由黄连、黄芩、黄柏和栀子四味药组成,为清热解毒的代表方剂[1],其具有很好的抗内毒素、抗氧化、抗脑缺血、抗肿瘤、降血糖、抗菌消炎及神经保护等作用[2-4].HLJDT药理作用广泛,这和其内所含的化学成分是密切相关,HLJDT中主要含有生物碱类、黄酮类、环稀醚萜类及有机酸类成分,其中生物碱类成分主要来自于黄连和黄柏中,黄酮类成分来自于黄芩中,环烯醚萜类
【机 构】
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辽宁中医药大学药学院,辽宁大连116600
【出 处】
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世界中医药学会联合会中药新药创制专业委员会成立大会暨第一届学术年会
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目的：黄连解毒汤(HLJDT)出自《外台秘要》,由黄连、黄芩、黄柏和栀子四味药组成,为清热解毒的代表方剂[1],其具有很好的抗内毒素、抗氧化、抗脑缺血、抗肿瘤、降血糖、抗菌消炎及神经保护等作用[2-4].HLJDT药理作用广泛,这和其内所含的化学成分是密切相关,HLJDT中主要含有生物碱类、黄酮类、环稀醚萜类及有机酸类成分,其中生物碱类成分主要来自于黄连和黄柏中,黄酮类成分来自于黄芩中,环烯醚萜类成分及有机酸类成分来自于栀子中.HLJDT中的生物碱类成分及黄酮类成分具有很好的抗菌消炎、抗内毒素、抗氧化等作用.因此,对HLJDT中的总生物碱、总黄酮进行含量测定是十分有必要的.本实验通过紫外分光光度法对这些部位群中总生物碱、总黄酮的含量进行测定,建立HLJDT及各部位群中总生物碱、总黄酮的含量测定方法,为HLJDT的质量控制提取了参考.方法：按全方比例取黄连,黄芩,黄柏,栀子,分别10和8倍量的水回流提取两次,每次1小时.合并两次提取液,浓缩至干,并研成细粉,即得HLJDT全方固体粉末.按上述方法方法制备HLJDT全方提取液,静置即得HLJDT上清液和沉淀两部位群,沉淀通过聚酰胺柱色谱进行分离,上清液经浓缩后通过大孔吸附树脂柱进行分离得到各部位群；部位群浓缩至干粉.采用酸性染料比色法测定HLJDT及各部位群中总生物的含量,精密称取盐酸小檗碱对照品和全方固体,制备对照品和供试品溶液.精密吸取小檗碱对照品溶液,置分液漏斗中,小檗碱加入柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液(pH=3.2) 10.0 mL和溴甲酚紫溶液1.0mL,然后加入三氯甲烷10 mL,振摇,取三氯甲烷层[5-6],以相应试剂为空白,全波长扫描.紫外-可见分光光度法测定总黄酮的含量,准确称取芦丁对照品和全方粉末分制备对照品和供试品溶液.精密量取芦丁对照品溶液3.0 mL,加入5％ NaNO2溶液1.0 mL,摇匀再加入10％ Al(NO3)3溶液1.0 mL,摇匀后静置加入4％ NaOH溶液10.0 mL,再加水定容至刻度[7-9],以无芦丁对照品溶液的阴性试剂为空白,在200～600 nm波长范围内进行扫描,结果表明芦丁在340 nm处有最大吸收波长.分别精密称取全方、沉淀、上清液、上清液水洗、上清液醇洗、沉淀水洗、沉淀醇洗部位群,在410 nm和340 nm波长处测定吸光度,根据线性回归方程计算样品中总生物碱和总黄酮含量.结果：盐酸小檗碱和芦丁分别在0.04-0.20和0.008-0.048mg/mL范围内,吸光度与浓度具有良好的线性关系,平均回收率分别为为109.73％和100.13％,RSD分别为4.39％和3.14％.由测定结果可知,总生物碱含量从高到低依次为全方、上清、上清液醇洗、沉淀、沉淀水洗、沉淀醇洗,说明生物碱类成分主要分布在上清液中；全方中总黄酮含量最高,其次为上清液醇洗、沉淀、上清、沉淀水洗、沉淀醇洗,表明黄酮类成分主要分布在沉淀中,但是上清液经过50％醇洗脱后,总黄酮含量增加.结论：采用酸性染料比色法对HLJDT及各部位群中总生物碱的含量进行测定,方法学考察结果稳定,具有良好的线性关系.总生物碱含量最多的是全方,其次上清、上清液醇洗、沉淀、沉淀水洗、沉淀醇洗,表明生物碱类成分在上清和沉淀中都有一定比例存在,尤其上清中含量较大.沉淀主要是由生物碱和黄酮结合形成的,但由于沉淀部位群的溶解度不好,可能会影响测定结果,而从实验结果可知,沉淀中生物碱主要分布在沉淀水洗中,进一步证明部位群的分离是合理的.对HLJDT及各部位群中总黄酮的含量进行测定,方法学考察结果显示其具不稳定性,所以样品显色后应立即测定.该方法简单、准确,可用于HLJDT及各部位群中总生物碱、总黄酮的含量测定.
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