疥螨钙调蛋白的原核表达与分子特征研究

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(目的)钙调蛋白是一种钙结合蛋白,参与介导的生命活动进程有炎症反应、代谢、细胞凋亡、肌肉收缩、细胞内运动、短期和长期记忆、神经生长以及免疫反应等,本研究旨在探讨疥螨(Sarcoptes scabiei)钙调蛋白在疫苗和诊断候选抗原方面的潜力。(方法)从疥螨总RNA中扩增钙调蛋白基因,构建原核表达载体进行诱导表达,并对纯化的重组钙调蛋白进行Western blotting分析、荧光免疫组化定位以及钙离子结合实验。(结果)从疥螨总RNA中扩增出了钙调蛋白基因,其ORF框有450bp,共编码149个氨基酸。在大肠杆菌中表达的重组钙调蛋白分子质量大约为20KDa,Western-blot显示重组钙调蛋白能够与人工感染疥螨的兔阳性血清发生特异性结合,具有一定的免疫原性。荧光免疫组化结果显示钙调蛋白主要分布在疥螨虫体内部。重组钙调蛋白与钙离子结合后,在SDS-PAGE中显示出变快的电泳迁移率,非变性电泳中显示出变慢的电泳迁移率。与钙离子结合后,重组钙调蛋白的构象也发生了变化。(结论)本研究成功克隆表达了疥螨的钙调蛋白,为进一步了解疥螨钙调蛋白的功能以及作为疫苗和诊断抗原候选蛋白的潜力提供了基础资料。
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