【摘 要】
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针对猪脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV) VP1基因序列设计并合成一对引物,构建含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测EMCV核酸的SYBR Green Ⅰ real-time PCR方法.该方法线性关系好,标准曲线的相关系数达到0.991；敏感性高,初始模板的检出下限为1×101拷贝/μL,比常规PCR方法高100倍；特异性强,与其他猪
【机 构】
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Institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China;Guangx
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针对猪脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV) VP1基因序列设计并合成一对引物,构建含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测EMCV核酸的SYBR Green Ⅰ real-time PCR方法.该方法线性关系好,标准曲线的相关系数达到0.991；敏感性高,初始模板的检出下限为1×101拷贝/μL,比常规PCR方法高100倍；特异性强,与其他猪源病毒如FMDV、PRRSV、CSFV、PRV均不发生交叉反应；重复性好,组内与组间的变异系数均小于3％.应用所建立的方法检测17份临床可疑病例的心、脑组织样品,样品1份为阳性.结果表明,本研究建立的real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于EMCV的病原检测及定量分析.
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