【摘 要】
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目的:探讨细胞内Ca2+在BMSCs向肝细胞定向诱导分化过程中的作用以及相关信号通路的检测.方法:用全骨髓贴壁法从大鼠骨髓中分离BMSCs后进行纯化和扩增,并加入肝细胞生长因子(HGF)诱导BMSCs向肝细胞分化,应用流式细胞技术分别检测肝细胞生长因子诱导分化BMSCs和对照BMSCs内游离[Ca2+]i.将不同浓度的尼莫地平加入HGF诱导的BMSCs培养液中进行干预后分为三组HGF+N1组、HG
【机 构】
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青岛市中心血站输血医学研究所 山东省青岛市266071
【出 处】
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中华医学会临床输血学分会第一届学术年会
论文部分内容阅读
目的:探讨细胞内Ca2+在BMSCs向肝细胞定向诱导分化过程中的作用以及相关信号通路的检测.
方法:用全骨髓贴壁法从大鼠骨髓中分离BMSCs后进行纯化和扩增,并加入肝细胞生长因子(HGF)诱导BMSCs向肝细胞分化,应用流式细胞技术分别检测肝细胞生长因子诱导分化BMSCs和对照BMSCs内游离[Ca2+]i.将不同浓度的尼莫地平加入HGF诱导的BMSCs培养液中进行干预后分为三组HGF+N1组、HGF+N2组、HGF+N3组,用倒置相差显微镜下观察细胞生长情况并用免疫细胞化学法检测AAT的表达;并用RT-PCR检测对照组和尼莫地平干预组钙调蛋白mRNA的表达,免疫印迹法(westem blotting)检测上述各组磷酸化ERK (P-ERK)的表达.
结果:加入HGF诱导分化的BMSCs细胞内[Ca2+]i高于对照组,差异有统计学意义.加入较大剂量的尼莫地平干预后,未见分化细胞且BMSCs的生长状态差;尼莫地平各组表达AAT的阳性细胞很少.RT-PCR检测各组钙调蛋白结果显示,与对照组C比较,G组和G+N1组钙调蛋白mRNA表达分别增加了1.95 (P＜0.05)倍和1.48倍(P＜0.05),G+N2组、G+N3组与对照组C比较组间无显著性差异(P＞0.05);Western Blotting检测P-ERK结果显示对照组C比较,G组和G+N1组钙调蛋白mRNA表达分别增加了1.44 (P＜0.01)和1.05 (P＜0.01)倍;G+N2组、G+N3组与对照组C比较组间无显著性差异(P＞0.05).
结论:Ca2+不仅参与细胞因子诱导BMSCs向肝细胞的定向分化,而且也参与维持BMSCs的存活和增殖.
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