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目的:构建基于荧光素酶的单次感染HIV药物筛选细胞模型用于抗HIV药物筛选。
方法:构建含荧光素酶报告基因luc的假型慢病毒质粒,将VSV—G外膜糖蛋白的表达质粒,HIV-1 Rev蛋白表达质粒,HIV Gag—pol蛋白表达质粒和含荧光素酶报告基因的重组慢病毒质粒共转染293FT细胞,制备假型慢病毒。在假型慢病毒生产和再感染新鲜293FT细胞的过程中加入逆转录酶和蛋白酶抑制剂(如AZT,Zidovudine),检测再感染新鲜293FT细胞中荧光素酶的表达水平,从而判断药物对HIV的抑制作用,进行模型的建立及条件的优化。
结果:成功地构建了含荧光素酶报告基因的重组慢病毒质粒pLenti—Luc。利用已知的抗HIV药物进行测试,发现HIV药物处理组细胞中荧光素酶活性低于对照组。
结论:成功地建立了基于荧光素酶的HIV药物筛选细胞模型,该系统使用单次感染的报告病毒,具有良好的安全性,而荧光素酶报告基因使该系统具备极高的敏感性。