论文部分内容阅读
目的:利用Treg荧光单标小鼠以及成功繁育的Treg-Th17双标小鼠，针对LPS和Zym致炎条件下Treg亚群的变化进行了体内研究。
方法:从美国哈佛大学医学院引进Treg和Th17荧光单标小鼠(即C57BL/6背景的Foxp3-GFPKI小鼠、Foxp3-RFPKI小鼠和IL-17A-GFPKI小鼠)，按照无特定病原体动物(special pathogen free,SPF)级动物饲养标准进行。室内温度控制在20℃-26℃,湿度50 ％-60%，照明采取12h昼夜交替的方式;小鼠的饮食由第三军医大学大坪医院野战外科研究所实验动物中心配制;饲养期间密切观察小鼠生长情况。依照遗传学规则进行将Foxp3-RFPKI小鼠和IL-17A-GFPKI小鼠进行配对繁殖，筛选Treg-Th17荧光双标小鼠(即IL-17A-GFPKI-homo-Foxp3-RFPKI小鼠)。利用该双标小鼠制备该小鼠LPS体内致炎模型，即将双标小鼠随机分为3组，每组5只，实验组再分为LPS处理24h和48h组，各自按lOmg/kg剂量尾静脉注射LPS(Sigma,055:B5)，继续饲养至LPS处理后24h和48h两个时相点，对照组尾静脉注射相同体积的等渗盐水;同时利用Treg荧光单标模型制备Zym体内致炎模型，分组条件同上，各自按腹腔注射Zym(溶剂为1×PBS)，剂量为600mg/kg，对照组腹腔注射与上述模型体积相等的1×PBS。在LPS和Zym处理24h组和48h组，取相应组别小鼠淋巴结和脾并制备细胞悬液anti mouse APC-CD4和PECYS-CD8染色，流式细胞分析各组别中CD4+Foxp3+和CDB+Foxp3+的百分数变化。
结果:第一批7只子2代小鼠中有3只小鼠(2a1早)为所需纯合子，自交3代连续基因分型结果均为Foxp3 RFPKI-homo-IL-17A-GFPKI，而且小鼠生长状态正常;LPS致炎处理能诱导明显的荧光，对照组CD8+Foxp3+低于CD4+Foxp3+(P<0.05)，但LPS各处理组CD8+Foxp3+的表达明高于CD4+Foxp3+，尤其是LPS处理24h组更是如此(P<0.01或P<0.05)，但对照组与LPS处理48 h组之间的差异无统计学意义(P>0.05);另一方面，Zym致炎后各时间点CD4+Foxp3+的比例取明显高于CDB+Foxp3+(P<0.05)。
结论:本实验培育的Foxp3 RFPKI-homo-IL-17A-GFPKI小鼠具有相同的基因表型和稳定的遗传学特征，是一种能够有效实时监测机体Treg-Th17平衡变化的模式动物和全新在体研究平台;机体遭受LPS刺激后，CD4+Treg亚群的作用明显弱于CD8+Treg亚群，但Zym刺激却能使CD4+Treg亚群的作用明显上升并使CD8+Treg亚群的变化减少。其原因和机制值得进一步关注和探索。