【摘 要】
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本文以大肠杆菌JM109基因组DNA为模板,PCR扩增天冬氨酸转氨酶基因AspC,以pET-22b为表达载体,以载体自带的pelB为信号肽,构建分泌型重组表达载体,经PCR及限制性内切酶酶切验证
【机 构】
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南京工业大学制药与生命科学学院,南京,210009
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本文以大肠杆菌JM109基因组DNA为模板,PCR扩增天冬氨酸转氨酶基因AspC,以pET-22b为表达载体,以载体自带的pelB为信号肽,构建分泌型重组表达载体,经PCR及限制性内切酶酶切验证阳性克隆,重组载体转化到大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导目的基因表达,经过检测,发酵液上清天冬氨酸转氨酶酶活为23.4μmolPPA·h-1·mL-1,但菌泥酶活近39μmolPPA·h-1·mL-1,SDS-PAGE分析表明目的蛋白与信号肽呈融合蛋白表达(约45kDa),具有较高的表达量,但目的蛋白与信号肽未能较好的识别并剪切.
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