乳及乳制品中阪崎肠杆菌PCR-DHPLC检测新技术的建立

来源 :第二届全国人畜共患病学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:s1u2n3cn
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坂崎杆菌是人和动物肠道内寄生的一种革兰氏阴性无芽孢杆菌,属肠道杆菌科的一种,是条件致病菌。阪崎肠杆菌能引起严重的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎和菌血症,并且可能引起神经系统后遗症和死亡,死亡率高达50%以是。阪崎肠杆菌传统检测方法要用前增菌和选择性增菌等多种培养基,培养、鉴定、操作步骤繁杂,工作量大,从培养到生化鉴定耗时至少5~8d。 本文应用聚合酶链式反应(PCR)结合DHPLC技术建立了食品中阪崎肠杆菌的快速检测方法:根据阪崎肠杆菌16S-23S rRNA特异基因序列的特点,设计、合成特异性引物并进行引物筛选和PCR体系的优化,扩增产物经DHPLC技术进行核苷酸分析以达到快速检测坂崎肠杆菌的目的。首先以阪崎肠杆菌、普通变形杆菌、奇异变形杆菌等59株参考菌株做特异性试验、重现性试验,并将阪崎肠杆菌菌株稀释成不同梯度,做灵敏度试验。结果表明该方法具有较好的特异性,灵敏度较高,检测低限可达到为25CFU/mL。用该方法筛选检测670份检验样品,有7株阪崎肠杆菌分离菌株为阳性,与PCR法、实时荧光PCR法筛选检测的结果一致。
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