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目的：构建缝隙连接蛋白(Cx)43基因shRNA慢病毒表达载体,并检测其对大鼠心肌细胞Cx43基因的沉默效果。
方法：针对Cx43基因序列,设计RNA干扰靶点序列,合成靶序列的双链DNA,接入pGCL-GFP载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用pHelperl.0和pHelper2.0质粒共转染293T细胞，包装产生具备感染能力的慢病毒。以293T细胞中绿色荧光蛋白的表达水平测定病毒滴度，以最适感染复数感染大鼠心肌细胞，通过荧光显微镜检测感染效率，应用Real-Time PCR和Western blot检测Cx43mR-NA及Cx43蛋白表达，评价其抑制效果。
结论：成功构建Cx43 shRNA慢病毒载体有效感染大鼠心肌细胞后，显著抑制了心肌细胞Cx43的表达。
方法：针对Cx43基因序列,设计RNA干扰靶点序列,合成靶序列的双链DNA,接入pGCL-GFP载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用pHelperl.0和pHelper2.0质粒共转染293T细胞，包装产生具备感染能力的慢病毒。以293T细胞中绿色荧光蛋白的表达水平测定病毒滴度，以最适感染复数感染大鼠心肌细胞，通过荧光显微镜检测感染效率，应用Real-Time PCR和Western blot检测Cx43mR-NA及Cx43蛋白表达，评价其抑制效果。
结论：成功构建Cx43 shRNA慢病毒载体有效感染大鼠心肌细胞后，显著抑制了心肌细胞Cx43的表达。