多子小瓜虫是一种世界性分布的淡水鱼类体表寄生原生动物,由其寄生引起的鱼类皮肤增生形成白点,称"白点病"。该病爆发给水产养殖业造成严重经济损失。传统防治小瓜虫病主要靠化学药物,其中,最常使用的是孔雀石绿,但是化学药物不仅污染水环境,而且其残留威胁消费者健康,尤其是孔雀石绿具有"三致"作用,在渔业上已被禁用。迫切需要研发安全有效的新型防治小瓜虫病药物。中草药易降解,残留低,对环境和人畜安全,并且已发现存在杀灭多子小瓜虫的中草药植物种类,从其中分离鉴定杀小瓜虫的活性化合物,是研发安全有效的防治小瓜虫病新型药物的有效途径。本研究从54种中草药中筛选出有杀虫活性的植物种类,再利用活性追踪法从酒精提取物中分离纯化活性化合物。将纯化的活性成分进行杀虫实验,筛选出效果最好的活性化合物。在此基础上研究高活性化合物的药效、毒理、药物残留和稳定性。具体结果如下:1.杀灭多子小瓜虫的中草药植物种类:54种中草药植物酒精提取物杀多子小瓜虫幼虫活性显示其中36种中草药的酒精提取物具有杀虫活性,100 mg/L浓度下在4 h内100%杀灭多子小瓜虫幼虫。其中花椒、松节、仙鹤草、旋复花、直立白薇、藏红花、徐长卿和蚤休的效果好,它们的酒精提取物在25 mg/L浓度下可在4 h内100%杀灭多子小瓜虫幼虫。2.分离鉴定的杀虫活性化合物:采用活性追踪法分离纯化活性物质,即用酒精提取中草药,获得酒精粗提物,依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取酒精提取物,杀虫活性最好的萃取物经过硅胶柱层析获得不同极性段浸膏,杀虫活性最好的浸膏经过高效液相色谱分离纯化获得活性化合物。最终从直立白薇、仙鹤草和徐长卿中各分离纯化了一种活性化合物,结合质谱(ESI-MS)、高分辨质谱(HI-ESI-MS)、DEPT谱、核磁共振氢谱(1H-NMR)和核磁共振碳谱(13C-NMR)等波谱数据鉴定其结构,确定直立白薇的活性化合物为直立白薇苷C(Cynatratoside-C),仙鹤草的活性化合物为坡模酸(Pomolic acid),以及徐长卿的活性化合物为沃尔诺苷元(Woorenogenin)。3.活性化合物的药效和毒性:经过离体杀多子小瓜虫实验,结果显示直立白薇苷C、坡模酸和沃尔诺苷元100%杀灭感染性幼虫的最低浓度分别为0.25mg/L、16 mg/L和12.5 mg/L,100%杀灭成虫的最低浓度分别为0.25 mg/L、32 mg/L和12.5 mg/L,阻止包囊繁殖出感染性幼虫的最低有效浓度分别为0.06 mg/L、64 mg/L和12.5 mg/L。用活性最好的直立白薇苷C进行防治小瓜虫病实验,结果显示2 mg/L的直立白薇苷C能在48 h内治愈草鱼小瓜虫病;0.25 mg/L的药液治疗患病鱼和健康鱼混养体系10天,能有效防治小瓜虫病。急性毒性实验和溶血性实验结果显示,直立白薇苷C对草鱼的96 h半致死浓度为(LC50)为46.8 mg/L,安全浓度为10.2 mg/L;直立白薇苷C在1000 mg/L以下浓度对哺乳动物血细胞没有细胞毒性。4.直立白薇苷C的残留消除规律:建立了直立白薇苷C在草鱼主要组织器官中残留量的HPLC-ESI/MS检测方法,直立白薇苷C在肝脏、肌肉、肾脏和血清中的最低检测量分别为2.57 ng/g、1.24 ng/g、4.02 ng/g和2.30 ng/m L。在23±0.5℃水温条件下,以2 mg/kg直立白薇苷C的剂量单次腹腔注射草鱼,结果显示,肝脏、肾脏和血液中直立白薇苷C浓度在0.5 h达到峰值,随后2.5 h内直立白薇苷C的浓度迅速降低,再往后消除速度变得缓慢,肝脏和血清在第240 h(10天)低于检测限,而肾脏的在第360 h(15天)低于检测限;肌肉中的直立白薇苷C的浓度在3 h达到峰值,随后3-24 h内消除迅速,在第360 h(15天)低于检测限。5.直立白薇苷C的稳定性:采用经典恒温加速试验法预测了直立白薇苷C在25°C下的有效保质期为3.3年。常温留样观察6个月,其杀虫效果没有显著差异。留样观察3年,直立白薇苷C杀成虫和幼虫的最低浓度没有变化,对包囊的最低有效浓度上升到0.125 mg/L。综上所述,从直立白薇中分离纯化的直立白薇苷C具有极好的杀多子小瓜虫活性,对哺乳动物血细胞和草鱼毒性低,在草鱼体内药物残留时间短,在室温下储存时间长。因此,直立白薇苷C是一种安全高效的、具有开发价值的抗多子小瓜虫活性化合物。