超声造影剂介导下增强腺病毒相关病毒心肌靶向转染率的实验研究

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目的本研究旨在探讨超声微泡破裂法增强腺相关病毒载体(rAAV2-GFP)心肌靶向转染的转染效率及经尾静脉注射rAAV2-GFP的最佳滴度以及实验前后大鼠心功能的变化。方法同种属、同窝别、同年龄雌雄不限SD大鼠21只,随机分为7组,每组3只。根据rAAV2-GFP滴度不同将实验组分为以下6组:1组,滴度为1.5×109vg/ml;2组,滴度为3.0×109vg/ml;3组,滴度为1.5×1010vg/ml;4组,滴度为3.0×1010vg/ml;5组,滴度为1.5×1011vg/ml;6组,滴度为3.0×1011vg/ml。各实验组通过尾静脉注入携带上述不同滴度rAAV2-GFP的SonoVue微泡造影剂1.2 ml。对照组通过尾静脉注入1.2 ml的SonoVue。并进行体表心脏部位爆破心腔及心肌组织中的造影剂微泡,14 d后荧光显微镜下观察心肌内荧光的表达量代表腺相关病毒载体的转染量;其次将同种属、同窝别、同年龄雌雄不限SD大鼠20只,随机分为2组。对照组给予单纯尾静脉注射超声造影剂SonoVue并于体表心脏部位进行超声照射破坏造影剂微泡(不携带rAAV2-GFP);实验组给予尾静脉注射携带有rAAV2-GFP的SonoVue并于体表心脏部位进行超声照射。于实验前及实验后14 d采集大鼠二尖瓣水平短轴、乳头肌水平短轴及心尖短轴二维灰阶动态图。得出各节段及左室整体的应变、应变率、旋转角度、扭转角度、达峰时间参数。采用二维及M型超声心动图分别记录心率(HR)、左室舒张末期容积(EDV)、左室收缩末期容积(ESV)、左室射血分数(EF)、短轴缩短率(FS);将SD大鼠60只随机分为6组:第一组给予单纯尾静脉注射超声造影剂SonoVue并进行超声照射爆破微泡造影剂;第二组给予单纯经尾静脉注射rAAV2-GFP,但不进行超声照射;第三组给予尾静脉注射rAAV2-GFP并进行超声照射爆破微泡造影剂;第四组先给予尾静脉注射超声造影剂再超声爆破造影剂微泡,再给予尾静脉注射rAAV2-GFP;第五组只给予尾静脉注射携带rAAV2-GFP超声造影剂,但不进行超声照射;第六组给予造影剂携带rAAV2-GFP尾静脉注射,并进行超声照射,爆破微泡造影剂。14 d后取心脏、肝脏、脑组织做冰冻切片荧光显微镜下进行荧光表达情况的观察。结果及结论超声及超声造影剂介导并进行定点爆破可以高效安全地促进腺相关病毒载体在心肌内的靶向转染。经尾静脉输入法超声介导下促进腺相关病毒心肌转染的最佳滴度为1.5×1011vg/ml;超声介导下增强腺相关病毒心肌靶向转染对大鼠左心功能无影响。
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