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目的:研究胰岛素产生细胞IPCs微囊化和体外生长分泌功能规律,探索其作为胰岛B细胞替代物的新资源。
方法:取小鼠股骨和胫骨,冲出骨髓,以2×106/ml接种到25cm2培养瓶内,于37℃、5%C02培养箱中培养。传至三四代,用50μg/ml大鼠胰腺提取物诱导分化为IPCs。收集诱导后的IPCs使其悬浮于1.5%海藻酸钠溶液中,细胞密度为1.0~2.0x109L-1,通过气体微囊发生器,调节气体的流速分别为3L/min,5 L/min,7L/min,选择最佳气体流速,喷入100mmol/L CaCl2溶液中,以形成海藻酸钠钙珠,生理盐水洗3次,然后用0.05%多聚赖氨酸包裹,生理盐水洗3次,再与0.14%的海藻酸钠反应,生理盐水洗3次,最后用55mmol/L柠檬酸钠处理,获得微囊化IPCs。将微囊化IPCs放入六孔板中,每孔加入含15%FBS的IMDM培养液4ml,置37℃、5%C02、95%饱和湿度的培养箱中培养。用放射免疫法检测微囊化IPCs分泌能力,采用6-羧基乙二酸荧光素(6-Carboxyflucrescein diacetate,6-CFDA)和碘化丙啶(Propidium iodide,PI)染色法测定微囊内细胞存活率。
结论:本研究制备的微囊化IPCs能在较长时间保持存活和分泌功能,为胰岛B细胞提供新的来源,可用于糖尿病的发病机理和治疗研究。