三疣梭子蟹寄生纤毛虫异阿脑虫的分离鉴定

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2018年春,宁波一养殖场大量抱卵三疣梭子蟹死亡。显微镜观察发现病死蟹多个组织,尤其是血淋巴液中含有大量纤毛虫。分离,通过体外培养发现,该纤毛虫生活水温为0-20℃,最适为12℃,与三疣梭子蟹越冬期水温一致。采用纤毛虫18SrDNA、28SrDNA和ITS1+5.8s+ITS2引物,进行PCR扩增得到的DNA序列长度分别为1704、1732和521bp,将扩增产物进行测序比对,发现其与异阿脑虫属(Mesanophrys)的4个种,8个亚种的4个18SrDNA和2个28SrDNA序列相似性为96.81%-98.21%,与6个ITS1+5.8s+ITS2序列相似性除1个为92.37%外其余为95.23%-95.37%。构建系统进化树,显示该纤毛虫与异阿脑虫属纤毛虫形成一个紧密的簇。提示该纤毛虫与其他异阿脑虫为种间关系。进一步采用微分干涉相差显微镜和扫描电子显微镜观察,得知虫体卵圆形,前端削尖,后端钝圆,体长×体宽为43.65±4.76×13.34±2.26μm,内质颗粒较多,其形态特征与异阿脑虫属纤毛虫相似。因此,暂定该纤毛虫为异阿脑虫属一未定种(Mesanophrysspp.)。用人工培养的该纤毛虫感染健康成体三疣梭子蟹数日后,大量蟹患病死亡,且症状与上述养殖场的病蟹相似,认为该纤毛虫是引起越冬三疣梭子蟹死亡的病原。
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