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目的:构建小鼠p27kip1真核表达载体,探讨其对单个核细胞生长情况和细胞周期的影响,为进一步研究p27kip1在疾病防治中的作用奠定基础。
方法:将小鼠p27kip1基因克隆至pcDNA3.0真核表达载体上,并经脂质体介导转染至小鼠单个核细胞中,应用MTT法和流式细胞仪分析转染细胞生长情况和细胞周期。
结果:经酶切分析和测序鉴定,成功构建了小鼠pcDNA3.0/p27kip1重组质粒;经pcDNA3.0/p27kip1转染的单个核细胞中p27蛋白表达增多,其生长增殖不仅受到明显抑制,而且处于Gl/GO期的细胞显著增加,处于S期的细胞显著减少。
结论:构建的pcDNA3.0/p27kip1真核表达载体能够在单个核细胞中表达,且高表达的pcDN.A3.0/p27kip1可以通过抑制细胞周期的方式抑制单个核细胞的生长。