【摘 要】
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采用RT-PCR技术从SARS冠状病毒基因组扩增编码S蛋白的S2基因片段(第2170到2814 位碱基),克隆到pMD18-T载体并测序。用限制性内切酶消化后,S2基因亚克隆至表达载体pGEX-4T-2,
【机 构】
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华中科技大学同济医学院; 深圳市疾病预防控制中心;
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采用RT-PCR技术从SARS冠状病毒基因组扩增编码S蛋白的S2基因片段(第2170到2814 位碱基),克隆到pMD18-T载体并测序。用限制性内切酶消化后,S2基因亚克隆至表达载体pGEX-4T-2, 转化大肠杆菌JM109,筛选鉴定阳性菌落。扩增培养含pGEX-S2质粒的JM109大肠杆菌,经IPTG诱导,超声破菌,GSH-Sepharose亲和层析纯化目的蛋白,Western-blot检测SARS患者血清可以识别纯化的蛋白。用此蛋白免疫NIH小鼠,获得了高滴度抗GST-S2抗体的血清,为进一步研究SARS冠状病毒的亚单位疫苗奠定基础。
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